[發明專利]一種基于液相色譜-串聯質譜的煙葉馬來酰肼及其糖苷的定量分析方法

有效

• 申請號: 201711033934.5
• 申請日: 2017-10-30
• 公開（公告）號: CN107589206B
• 公開（公告）日: 2020-02-04
• 發明（設計）人: 李勇;逄濤;師君麗;孔光輝;吳玉萍;陳萍;趙立紅
• 申請（專利權）人: 云南省煙草農業科學研究院
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 53116 昆明知道專利事務所(特殊普通合伙企業)
• 代理人: 張玉;謝喬良

本發明公開了一種基于液相色譜?串聯質譜的煙葉馬來酰肼及其糖苷的定量分析方法，所述的定量分析方法以下步驟：1）樣品前處理：準確稱取煙葉樣品粉末于離心管中，依次加入甲醇、甲基叔丁基醚、水作為提取劑，超聲，離心，取下層清液，加入內標溶液，離心濃縮去掉溶劑，加入乙腈復溶，復溶液轉入液相色譜進樣小瓶，待分析；2）標準曲線繪制；3）樣品分析：將步驟（1）處理后的待分析樣品進行液相色譜?串聯質譜分析，將得到的馬來酰肼及其糖苷的色譜質譜峰相對面積輸入校準曲線方程，計算得到相對應的物質濃度。本發明通過創造性的檢測煙葉中馬來酰肼自由態及馬來酰肼糖苷結合態的含量，極大的提高了分析結果的準確性，方法簡便、效率高。

技術領域

本發明屬于分析化學技術領域，具體涉及一種基于液相色譜串聯質譜技術的煙葉馬來酰肼及其糖苷的定量分析方法。

背景技術

馬來酰肼（1，2-二氫-3，6-噠嗪二酮，Maleic Hydrazide，MH)是一種人工合成的植物生長調節劑。馬來酰肼通過阻止細胞分裂而抑制煙草側芽的生長，是國內外煙草行業常用的抑芽劑。馬來酰肼作為常見農藥在煙草種植上大量使用，其在煙葉中的殘留也一直備受關注。國際煙草科學研究合作中心（CORESTA）2013年頒布的烤后煙葉馬來酰肼的指導殘留水平（GRL）為80 mg/kg。因此建立一種簡單、快速分析煙葉中馬來酰肼殘留物的方法對于保障煙葉安全、杜絕馬來酰肼抑芽劑的濫用具有重要意義。

馬來酰肼在煙葉中主要以自由態及糖苷結合態存在。其中糖苷結合態馬來酰肼包括馬來酰肼-O-β-D-葡萄糖苷和馬來酰肼-N-β-D-葡萄糖苷。文獻報道的煙葉中馬來酰肼測定方法包括分光光度法、液相色譜法、氣相色譜法、毛細管電泳法、液相色譜質譜法等。這些方法包含只測自由態馬來酰肼和將馬來酰肼糖苷水解后測定其總量兩種類型。其中只測自由態馬來酰肼無法反映馬來酰肼的真實殘留量，而將馬來酰肼糖苷水解后測定其總量的方法由于無法對兩種糖苷物質是否徹底水解進行評價，其測定準確性也值得商榷。

發明內容

本發明的目的在于提供一種基于液相色譜-串聯質譜的煙葉馬來酰肼及其糖苷的定量分析方法。

本發明的目的是這樣實現的，包括以下步驟：

1）樣品前處理：準確稱取煙葉樣品粉末于離心管中，依次加入甲醇、甲基叔丁基醚、水作為提取劑，其中所述的甲醇：甲基叔丁基醚：水的體積比為30~40：40~50：65~75，超聲，離心，取下層清液，加入內標溶液，離心濃縮去掉溶劑，加入乙腈復溶，復溶液轉入液相色譜進樣小瓶，待分析；所述的內標溶液為100 ng/mL的磷酸三苯酯的乙腈溶液；

2）標準曲線繪制：以甲醇為溶劑，配置10 μg/mL 的馬來酰肼及其糖苷的混合標準溶液，然后分別移取5、10、20、40、80、150 μL 標準混合溶液至離心管，再分別稱取不含馬來酰肼及其糖苷的煙葉樣品粉末至離心管作為樣品基質，當所述的煙葉樣品粉末為烤后煙葉樣品粉末時，稱取量為10 mg；當所述的煙葉樣品粉末為新鮮煙葉樣品粉末時，稱取量為100mg；制成不同濃度梯度的待測樣本，離心濃縮，除去樣品中的甲醇溶劑；然后按照步驟（1）中所述的樣品前處理進行處理，再轉至液相色譜-串聯質譜進行分析，得到每個濃度梯度樣本對應的色譜質譜相對內標的峰面積；將得到的相對峰面積和其對應的濃度梯度進行線性擬合，得到校準曲線方程和線性相關系數；

3）樣品分析：將步驟（1）處理后的待分析樣品進行液相色譜-串聯質譜分析，將得到的馬來酰肼及其糖苷的色譜質譜峰相對面積輸入校準曲線方程，計算得到相對應的物質濃度。

與現有技術相比，本發明的有益效果：

1、本發明建立了一種基于液相色譜-串聯質譜的煙葉中馬來酰肼及其糖苷的分析方法，通過創造性的檢測煙葉中馬來酰肼自由態及馬來酰肼糖苷結合態的含量，極大的提高了分析結果的準確性，有效避免了現有技術中僅測自由態馬來酰肼或者將馬來酰肼糖苷水解后測定總量帶來的不確定性，而且本發明的分析方法簡便、效率高。