[發(fā)明專利]松肉粉中木瓜蛋白酶活力的檢測方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201711033536.3 | 申請日： | 2017-10-30 |
| 公開（公告）號： | CN107884351A | 公開（公告）日： | 2018-04-06 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 王勝利;鐘澄立;張志偉;葉淑娟 | 申請（專利權(quán)）人： | 廣東百味佳味業(yè)科技股份有限公司 |
| 主分類號： | G01N21/31 | 分類號： | G01N21/31 |
| 代理公司： | 東莞市華南專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司44215 | 代理人： | 王雪镅 |
| 地址： | 523000 廣東省*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 松肉粉中 木瓜蛋白酶 活力 檢測 方法 | ||
1.松肉粉中木瓜蛋白酶活力的檢測方法，其特征在于：它包括以下步驟：
步驟一、研磨松肉粉：將松肉粉置于研缽中，然后滴入酶稀釋液研磨，直至不出現(xiàn)細(xì)小顆粒為止，得到研磨混合物；
步驟二、稀釋：往步驟一得到的研磨混合物中加入酶稀釋液，混合均勻后，得到待測樣品溶液；
步驟三、待測樣品酶測試的吸光度的測定：取兩支帶塞試管各精確加入待測樣品溶液1mL，置恒溫水浴中預(yù)熱，然后精確加入酪蛋白溶液5mL，同時(shí)啟動(dòng)秒表計(jì)時(shí)，振蕩旋流使之充分混合，然后將試管封口放回水浴，并準(zhǔn)確計(jì)時(shí)10min，立即精確加入三氯乙酸溶液5mL，搖勻，然后水浴保溫30min，過濾得到濾液，以水做空白于280nm波長測定濾液的吸光度A1，即為待測樣品酶測試的吸光度；
步驟四、待測樣品空白測試的吸光度的測定：另取兩支帶塞試管各精確加入待測樣品溶液1mL，置恒溫水浴中預(yù)熱，然后精確加入5mL三氯乙酸溶液，準(zhǔn)確計(jì)時(shí)10min，然后精確加入酪蛋白5mL，搖勻，然后水浴保溫30min，過濾得到濾液，以水做空白于280nm波長測定濾液吸光度AO，即為待測樣品空白測試的吸光度；
步驟五、酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)液的吸光度的測定：另精確稱取L-酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)品0.050g，用0.1mol/L鹽酸溶解，并用水定容至1000mL，然后用水做空白在280nm波長測定吸光度As，即為酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)液的吸光度；
步驟六、計(jì)算酶活力：所述酶活力的計(jì)算公式如下：
式中：
A1——待測樣品酶測試的吸光度；
Ao——待測樣品空白測試的吸光度；
11——參加反應(yīng)的溶液總體積，單位為毫升(mL)；
n——樣品稀釋總倍數(shù)；
As——酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)液的吸光度；
50——酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)液濃度，單位為微克每毫升(μg/mL)；
10——反應(yīng)時(shí)間，單位為分鐘(min)；
m——樣品質(zhì)量，單位為克(g)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的松肉粉中木瓜蛋白酶活力的檢測方法，其特征在于：所述酶活力的計(jì)算公式中，所述樣品稀釋總倍數(shù)為200。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的松肉粉中木瓜蛋白酶活力的檢測方法，其特征在于：所述步驟一中，研磨松肉粉：精確稱取松肉粉樣品1g～2g，將松肉粉置于研缽中，然后滴入酶稀釋液研磨，直至不出現(xiàn)細(xì)小顆粒為止，得到研磨混合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的松肉粉中木瓜蛋白酶活力的檢測方法，其特征在于：所述步驟二中，稀釋：往步驟一得到的研磨混合物用水稀釋定容至100mL容量瓶中，得到樣品稀釋液，然后吸取5mL樣品稀釋液和5mL酶稀釋液混合搖勻，作為待測樣品溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的松肉粉中木瓜蛋白酶活力的檢測方法，其特征在于：所述步驟三中，所述恒溫水浴中預(yù)熱的溫度為38℃～42℃，預(yù)熱時(shí)間為8min～12min。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的松肉粉中木瓜蛋白酶活力的檢測方法，其特征在于：所述步驟四中，所述恒溫水浴中預(yù)熱的溫度為38℃～42℃，預(yù)熱時(shí)間為8min～12min。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的松肉粉中木瓜蛋白酶活力的檢測方法，其特征在于：所述步驟一中，所述酶稀釋液的制備方法為：精確稱取0.528g L-半胱氨酸鹽酸鹽及0.224g乙二胺四乙酸二鈉，用90mL濃度為0.05mol/L的磷酸氫二鈉溶液溶解，然后用濃度為0.1mol/L的氫氧化鈉溶液或0.1mol/L的鹽酸溶液調(diào)至pH＝0.6，加水定容至100mL，即制得所述酶稀釋液；
其中所述步驟一使用的酶稀釋液為新鮮配制的酶稀釋液。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的松肉粉中木瓜蛋白酶活力的檢測方法，其特征在于：所述步驟三中，所述酪蛋白溶液的制備方法為：稱取酪蛋白0.60g，加入80mL濃度為0.05mol/L的磷酸氫二鈉溶液，于55℃水浴攪拌溶解后，用0.1mol/L的鹽酸溶液調(diào)至pH＝0.6，定容至100mL，搖勻，置于40℃水浴備用，即制得所述酪蛋白溶液；
其中，所述步驟三使用的酪蛋白溶液為新鮮配制的酪蛋白溶液。
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G01N 借助于測定材料的化學(xué)或物理性質(zhì)來測試或分析材料
G01N21-00 利用光學(xué)手段，即利用紅外光、可見光或紫外光來測試或分析材料
G01N21-01 .便于進(jìn)行光學(xué)測試的裝置或儀器
G01N21-17 .入射光根據(jù)所測試的材料性質(zhì)而改變的系統(tǒng)
G01N21-62 .所測試的材料在其中被激發(fā)，因之引起材料發(fā)光或入射光的波長發(fā)生變化的系統(tǒng)
G01N21-75 .材料在其中經(jīng)受化學(xué)反應(yīng)的系統(tǒng)，測試反應(yīng)的進(jìn)行或結(jié)果
G01N21-84 .專用于特殊應(yīng)用的系統(tǒng)
