[發明專利]一種提高猴頭菇多糖免疫活性的羥乙基化方法

有效

• 申請號: 201711033181.8
• 申請日: 2017-10-30
• 公開（公告）號: CN107722133B
• 公開（公告）日: 2020-04-17
• 發明（設計）人: 秦韜;黃一帆;任喆;李健;馬玉芳;黃小紅;俞道進
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61P37/04
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊;林文弘

本發明公開了一種提高猴頭菇多糖免疫活性的羥乙基化方法，先將猴頭菇多糖溶于氫氧化鈉和氯化鈉的混合溶液中，攪拌溶解；將所得溶液冷卻至0℃，并通入氮氣排出空氣，然后逐滴加入環氧乙烷，在冰浴條件下攪拌反應；反應后將所得溶液升溫至室溫，攪拌過夜；次日用醋酸中和至中性，然后加入乙醇和丙酮，出現白色沉淀后，離心分離，水溶解沉淀，再經透析、冷凍干燥后得到羥乙基化猴頭菇多糖。本發明通過對猴頭菇多糖進行羥乙基化修飾，從而提高了猴頭菇多糖免疫活性，所制得的羥乙基化猴頭菇多糖能顯著提高DCs的抗原遞呈能力，促進DCs細胞分泌IL?12、IL?18、IL?15。

技術領域

本發明屬于動物醫學領域,具體涉及一種提高猴頭菇多糖免疫活性的羥乙基化方法。

背景技術

多糖是一種重要的生物大分子，其參與體內各種生理代謝，在調節免疫功能、細胞識別、細胞間物質的運輸、癌癥的診斷與治療等都有重要的作用。研究發現，多糖具有的多種生物活性與其結構、構像等有著密切的關系。通過分子修飾的手段，改變多糖的官能團，可以有針對的提高多糖的活性。目前修飾的方法主要有硫酸化、乙酰化、磺酰化、羧甲基化和磷酸化等，均可提高多糖的活性。

國內外有關羥乙基化猴頭菇多糖提高免疫活性的研究應用文獻很少，僅見張健等（2003）報道了羥乙基化牛膝多糖的合成方法，未見應用響應曲面對反應條件優化，也未見羥乙基化多糖提高免疫活性的報道。

檢索到國內有羥乙基茯苓多糖硫酸酯及其制備方法技術的發明專利申請，未見羥乙基化猴頭菇多糖提高免疫活性技術的發明專利申請。

發明內容

本發明的目的在于針對現有技術不足，提供一種提高猴頭菇多糖免疫活性的羥乙基化方法。本發明通過對猴頭菇多糖進行羥乙基化修飾，從而提高了猴頭菇多糖免疫活性，所制得的羥乙基化猴頭菇多糖能顯著提高DCs的抗原遞呈能力，促進DCs細胞分泌IL-12、IL-18、IL-15。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種提高猴頭菇多糖免疫活性的羥乙基化方法，具體包括以下步驟：

（1）將500 mg猴頭菇多糖溶于25 mL氫氧化鈉和氯化鈉的混合溶液（氫氧化鈉的濃度為3wt%，氯化鈉的濃度為3wt%）中，室溫攪拌至溶解，得到混合溶液A；

（2）將步驟（1）所得混合溶液A在冰浴條件下冷卻至0 ℃，向容器中充入氮氣以排除空氣，得到混合溶液B；

（3）往步驟（2）所得混合溶液B中逐滴加入2.5 mL環氧乙烷，然后冰浴條件下攪拌反應2 h，反應完成后，再使反應液自然升至室溫，攪拌過夜；

（4）次日用1 mol/L醋酸中和至中性得到混合溶液C，然后往混合溶液C加入乙醇后，再加入丙酮，所加入的丙酮體積為混合溶液C體積的4倍；出現白色沉淀后，離心分離，水溶解沉淀，透析袋透析24 h，冷凍干燥，得到羥乙基化猴頭菇多糖。

本發明的有益效果在于：本發明通過對猴頭菇多糖進行羥乙基化修飾，從而提高了猴頭菇多糖免疫活性，所制得的羥乙基化猴頭菇多糖能顯著提高DCs的抗原遞呈能力，促進DCs細胞分泌IL-12、IL-18、IL-15。

附圖說明

圖1為未羥乙基化猴頭菇多糖和羥乙基化猴頭菇多糖對DCs抗原遞呈能力的影響；

圖2為HEP（猴頭菇多糖）和HE-HEP（羥乙基化猴頭菇多糖）對DC細胞IL-12分泌量的影響；

圖3為未羥乙基化猴頭菇多糖和羥乙基化猴頭菇多糖對DCs分泌IL-18的影響。

具體實施方式

以下結合具體實施例對本發明做進一步說明，但本發明不僅僅限于這些實施例。

實施例1