[發(fā)明專利]一種雙孢蘑菇栽培種污染源和環(huán)境潔凈度的監(jiān)測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711030565.4
• 申請日: 2017-10-30
• 公開（公告）號: CN107586824A
• 公開（公告）日: 2018-01-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 朱建平;王文哲;曹榮利;仵鵬
• 申請（專利權(quán)）人: 山東瑞蕈天庫菌種開發(fā)有限公司;臨沂瑞澤生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/06
• 分類號: C12Q1/06
• 代理公司: 青島高曉專利事務(wù)所(普通合伙)37104
• 代理人: 吳澄

1.一種雙孢蘑菇栽培種污染源和環(huán)境潔凈度的監(jiān)測方法，包括：檢測用馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養(yǎng)基和肉湯瓊脂(EC)培養(yǎng)基的制作；用檢測PDA培養(yǎng)基和EC培養(yǎng)基在環(huán)境監(jiān)測點采集潛在的雜菌污染；以培養(yǎng)基中菌落的觀察記錄為依據(jù)對培養(yǎng)過程中栽培種的污染源進行監(jiān)測；以百級區(qū)檢測培養(yǎng)基上的菌落計數(shù)為依據(jù)對環(huán)境的潔凈度進行監(jiān)測。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種雙孢蘑菇栽培種污染源和環(huán)境潔凈度的監(jiān)測方法，其特征在于：所述的PDA培養(yǎng)基和EC培養(yǎng)基分別用于真菌和細菌的檢測培養(yǎng)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種雙孢蘑菇栽培種污染源和環(huán)境潔凈度的監(jiān)測方法，其特征在于：所述的PDA培養(yǎng)基的制作方法為：脫皮馬鈴薯200g，加入適量的蒸餾水煮熟后濾出濾液，加入葡萄糖20g、瓊脂20g，加入蒸餾水到1L，電磁爐加熱攪拌至充分溶解，高壓蒸汽122℃，滅菌30min，超凈工作臺中冷卻至大約50℃倒大約45支90mm平板；EC培養(yǎng)基的制作方法為：EC肉湯培養(yǎng)基粉末37g，加入瓊脂20g，加入蒸餾水到1L，電磁爐加熱攪拌至充分溶解后，高壓蒸汽122℃，滅菌30min，超凈工作臺中冷卻至大約50℃倒大約45支90mm平板。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種雙孢蘑菇栽培種污染源和環(huán)境潔凈度的監(jiān)測方法，其特征在于：所述的沉降菌培養(yǎng)溫度分別為真菌24℃和細菌36℃。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種雙孢蘑菇栽培種污染源和環(huán)境潔凈度的監(jiān)測方法，其特征在于：所述的環(huán)境監(jiān)測點包括①操作臺②封口機③原種④培養(yǎng)袋⑤培養(yǎng)基⑥手套⑦凈化服⑧百級區(qū)。

6.根據(jù)權(quán)利要求1和5所述一種雙孢蘑菇栽培種污染源和環(huán)境潔凈度的監(jiān)測方法，其特征在于：所述的環(huán)境監(jiān)測點潛在的雜菌污染的采集方法為：

①操作臺檢測：接種操作前打開檢測培養(yǎng)皿放在接種操作臺一側(cè)，直到接種操作完成密封并編號為1號培養(yǎng)皿；

②封口機檢測：接種操作前打開檢測培養(yǎng)皿放在封口機上方檢測封口機上方空氣，直到接種操作完成密封并編號為2號培養(yǎng)皿；

③原種檢測：接種操作前用酒精噴灑原種瓶外壁并用酒精棉擦拭瓶壁、接種勺，打開檢測培養(yǎng)皿用接種勺取少許原種放入檢測培養(yǎng)皿并密封編號為3號培養(yǎng)皿；

④培養(yǎng)袋檢測：接種操作前用酒精噴灑培養(yǎng)袋并用酒精棉擦拭培養(yǎng)袋外包裝口用開口剪剪開外包裝，打開檢測培養(yǎng)皿深入包裝袋內(nèi)檢測培養(yǎng)袋包裝環(huán)境然后密封并編號為4號培養(yǎng)皿；

⑤培養(yǎng)基檢測：接種操作前用酒精噴灑滅菌袋口并打開滅菌袋用檢測培養(yǎng)皿取少許培養(yǎng)基然后密封并編號為5號培養(yǎng)皿；

⑥手套檢測：接種操作前打開檢測培養(yǎng)皿手指平伸放入接觸檢測培養(yǎng)皿完成后密封并編號為6號培養(yǎng)皿；

⑦凈化服檢測：接種操作前打開檢測培養(yǎng)皿并與凈化服移動接觸完成后密封并編號為7號培養(yǎng)皿；

⑧百級區(qū)檢測：接種操作開始前打開檢測培養(yǎng)基皿蓋放在百級捏袋區(qū)域，靜置30min后密封并編號為8號培養(yǎng)皿。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種雙孢蘑菇栽培種污染源和環(huán)境潔凈度的監(jiān)測方法，其特征在于：所述的以培養(yǎng)基皿中菌落的觀察記錄為依據(jù)對培養(yǎng)過程中栽培種的污染源進行監(jiān)測，是指對各個環(huán)境檢測點的PDA培養(yǎng)基和EC培養(yǎng)基中的菌落進行觀察記錄，同時對雙孢蘑菇栽培種培養(yǎng)過程中的污染情況進行監(jiān)測，將菌種培養(yǎng)過程中出現(xiàn)的污染情況與不同監(jiān)測點采樣的檢測培養(yǎng)基上菌落形態(tài)進行比對，根據(jù)雜菌污染種類的異同找出污染源。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種雙孢蘑菇栽培種污染源和環(huán)境潔凈度的監(jiān)測方法，其特征在于：以百級區(qū)檢測培養(yǎng)基上的菌落計數(shù)為依據(jù)對環(huán)境的潔凈度進行監(jiān)測，是指當(dāng)檢測PDA培養(yǎng)基和EC培養(yǎng)基上的真菌和細菌菌落數(shù)和大于1時，環(huán)境潔凈度不達標，需要對凈化室的空氣凈化系統(tǒng)和除菌系統(tǒng)進行排查。