[發明專利]一種快速檢測豬腺病毒的試劑以及方法

有效

• 申請號: 201711030142.2
• 申請日: 2017-10-30
• 公開（公告）號: CN107586886B
• 公開（公告）日: 2020-12-01
• 發明（設計）人: 陳平;李娜;鐘鑫濤;張婷婷;李楠
• 申請（專利權）人: 嘉興安宇生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6876;C12R1/93
• 代理公司: 杭州天昊專利代理事務所(特殊普通合伙) 33283
• 代理人: 向慶寧

本發明提供一用于檢測樣本中豬腺病毒的試劑，其中，該試劑包括如下引物對，所述的引物為上游引物：（5’—3’）ATCTTGAAATCACAATTCTTCTG；下游引物：（5’—3’）CAAGGAGCAGYTGGTGGAG，Y為簡并引物，為T或C；以及利用該試劑檢測豬腺病毒的方法；這樣的試劑或者方法檢測豬腺病毒特異性強，靈敏度高，可以快速檢測豬的腺病毒。

技術領域

本發明涉及一種用于檢測流體樣品中的腺病毒的試劑,特別地，屬于一種快速檢測豬腺病毒的試劑以及方法。

背景技術

下面的背景技術用于幫助讀者理解本發明，而不能被認為是現有技術。

腺病毒是雙鏈DNA病毒，具有典型的二十面體病毒外殼，病毒外殼含有三種主要的蛋白：六鄰體、五鄰體和纖突，這些蛋白對于腺病毒的感染起重要作用。在腺病毒感染中，復制早期的基因主要有E1A、E1B、E2A、E2B、E3、E4，其中E1基因表達產物對蛋白的復制和轉化起著重要作用，是病毒復制不可缺的產物。

豬腺病毒，屬于腺病毒科哺乳動物腺病毒屬，有4個血清型，豬腺病毒會引起豬腺病毒感染，存在一些腦炎、腎炎、肺炎和腹瀉等臨床癥狀，存在于普遍的豬群中，在豬的鼻腔、肛門、糞便中可以檢測到，根據分離病毒和檢測抗體的結果，發現世界各國的豬都在遭受該腺病毒的感染。

豬腺病毒只感染豬,不感染人和其他動物,但是該病毒可以轉導多種人和動物的細胞。以豬腺病毒為基礎的載體增殖滴度高,可以穩定地攜帶外源基因并實現外源基因在轉導細胞中高效表達。同時，豬腺病毒與人腺病毒之間沒有交叉免疫反應,因此,豬腺病毒載體既可以作為豬用疫苗的投遞系統,又具有作為人用基因治療和疫苗投遞系統的潛力。目前，對于豬腺病毒的疫苗載體遠遠小于對于人腺病毒的研究，豬腺病毒載體疫苗將是疫苗載體開發的重要一個組成部分，同時，豬腺病毒的檢測也是其市場化的一個短板。

基于復制缺陷型腺病毒載體制備的動物疫苗在以豬和牛為主的畜牧業中的運用正在逐步大規模實施。根據轉基因技術的安全性嚴格的規范，對復制缺陷型腺病毒載體動物疫苗應用在豬和牛的安全性和對環境的影響需要快速檢測?，F在，豬腺病毒、牛腺病毒以及人復制缺陷型腺病毒已經成為畜牧業生產中最為關注的腺病毒類型，對其快速檢測鑒定有著廣泛的需求以及巨大的運用前景。上述三種腺病毒，易于混合感染，快速檢測鑒定十分困難。

目前生物制品行業普遍采用細胞培養法，血吸附法，免疫熒光法進行檢測，但這些方法敏感度低，檢測周期長，檢測精度低，結果判定易受多種因素影響，客觀性不足，勞動量大等問題；常規PCR檢測法雖然敏感性、穩定性、特異性較好，但容易污染，造成假陽性結果。這就需要提供一種更為可靠的、快速檢測腺病毒，特別是豬腺病毒的試劑以及方法。

發明內容

我們的發明通過對NCBI數據庫已報道的豬腺病毒基因序列比對，使用在線的BLAST找到高度保守區基因序列DBP(DNA Binding Protein)，該序列在各個血清型中高度同源，通過反復比對、篩選，設計了用于檢測該序列的特異性的通用引物，不但適用于豬腺病毒5型，還適用于已知的其他3個血清型。

一方面，本發明提供一種用于檢測樣本中豬腺病毒的試劑，其中，該試劑包括1對引物，所述的引物為上游引物：(5’—3’)ATCTTGAAATCACAATTCTTCTG；下游引物：(5’—3’)CAAGGAGCAGYTGGTGGAG，Y為簡并引物，為T或C。

在一些優選的方式中，所述的試劑包括能夠完成核酸擴增的必要試劑。在一些優選的方式中，必要的試劑包括TaqDNA聚合酶。

在一些優選的方式中，所述的核酸擴增的方法為PCR、重組酶聚合酶擴增(RPA)、轉錄介導的擴增、基于核酸序列的擴增、信號介導的RNA擴增技術、鏈置換擴增、滾環擴增、環介導的DNA等溫擴增、等溫多重置換擴增、解鏈酶依賴性擴增、單引物等溫擴增、環解鏈酶依賴性擴增以及切口和延長擴增反應中的一種或者幾種。