[發明專利]一種基于錯配的銀的功能核酸的比色傳感器及其應用

有效

• 申請號: 201711027387.X
• 申請日: 2017-10-27
• 公開（公告）號: CN108051411B
• 公開（公告）日: 2021-03-09
• 發明（設計）人: 許文濤;羅云波;黃昆侖;田晶晶;肖冰;杜再慧;董凱
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 陳波

1.一種基于錯配的銀的功能核酸的比色傳感器，包括分子識別元件和信號轉換元件，其特征在于，

所述分子識別元件包括等溫擴增體系；所述等溫擴增體系包括A體系和B體系；

所述A體系包括：擴增模板、dNTPs和促發鏈；

所述B體系包括：Bst DNA聚合酶和Nt.BstNBI切刻內切酶；

所述分子識別元件識別銀離子，并將產生擴增產物；

所述促發鏈的序列(5’-3’)為：CCCCCCCCCCCCCCCCTTACCTTGGGGGGTT；

所述擴增模板的序列(5’-3’)為：CCCTACCCGCCCTACCCAACTGACTCAACCCCCCAAGGTAAGCCCCCCCCCCCCCCC；

其中擴增模板中GACTC為Nt.BstNBI切刻內切酶識別序列；

所述信號轉換元件包括硫代黃色素。

2.根據權利要求1所述的傳感器，其特征在于，所述B體系還包括Bst DNA聚合酶反應緩沖溶液和Nt.BstNBI切刻內切酶反應緩沖溶液。

3.權利要求1或2所述傳感器在銀離子檢測中的應用。

4.一種檢測銀離子的方法，其特征在于，包括如下步驟：

制備銀離子濃度和G-四鏈體功能核酸熒光強度關系的標準曲線；

按上述制備標準曲線的過程檢測待測樣品的G-四鏈體功能核酸熒光強度，通過上述標準曲線計算銀離子的濃度；

其中，制備銀離子濃度和G-四鏈體功能核酸熒光強度關系的標準曲線的步驟包括：

(1)將擴增模板，dNTPs，促發鏈和超純水混合均勻，制備A體系；將Bst DNA聚合酶，BstDNA聚合酶反應緩沖溶液，Nt.BstNBI切刻內切酶和Nt.BstNBI切刻內切酶的反應緩沖溶液混合均勻，制備B體系；

所述促發鏈的序列(5’-3’)為：CCCCCCCCCCCCCCCCTTACCTTGGGGGGTT；

所述擴增模板的序列(5’-3’)為：CCCTACCCGCCCTACCCAACTGACTCAACCCCCCAAGGTAAGCCCCCCCCCCCCCCC；

其中擴增模板中GACTC為Nt.BstNBI切刻內切酶識別序列；

(2)將不同濃度的銀離子溶液分別與A體系混合，然后分別與B體系混合，孵育擴增，終止反應后得到一系列的擴增產物；

(3)將上述一系列擴增產物分別與硫代黃色素原液、顯色緩沖液、超純水混勻并反應，形成G-四鏈體結構；

(4)測定步驟(3)的反應混合液的熒光強度，得到熒光強度隨銀離子濃度變化的標準曲線。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，步驟(2)的操作為：銀離子溶液與A體系混合后于55℃孵育5min，然后與B體系迅速進行混合，55℃孵育擴增20min，95℃保持10min以終止反應。

6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，步驟(3)中擴增產物加入量為10μL，顯色緩沖液加入量為50μL，硫代黃色素原液加入量為2μL，超純水加入量為38μL。

7.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，步驟(3)中所述顯色緩沖液的配方為：50mMTris-HCl，50mMKCl，pH7.2。

8.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，步驟(3)中反應溫度為25℃，反應時間為20min。