[發(fā)明專利]生物識別探針的構建方法及其邏輯運算方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711026889.0
• 申請日: 2017-10-27
• 公開（公告）號: CN108152250B
• 公開（公告）日: 2020-02-18
• 發(fā)明（設計）人: 張穎;汪聯輝;張磊;翁麗星;王飛;周浩
• 申請（專利權）人: 南京郵電大學
• 主分類號: G01N21/47
• 分類號: G01N21/47
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 葉連生

1.一種生物識別探針的構建方法，其特征在于，包括如下步驟：

1）.分別制備金銀核殼納米立方體Au@AgNCs溶膠和四面體結構DNA溶液，并將所述Au@AgNCs固定于氧化銦錫導電膜玻璃表面；

2）. 將所述四面體結構DNA溶液滴加到固定有Au@AgNCs的氧化銦錫導電膜玻璃表面，室溫下孵育2~6 h后，用超純水洗滌，并用氮氣吹干，得到基于tsDNA的單顆粒局域表面等離子體共振LSPR探針；

所述四面體結構DNA溶液的制備方法包括如下步驟：

2.1）將各條單鏈DNA溶解，在紫外分光光度計下測定260 nm處的吸收，并參考每條單鏈DNA的摩爾消光系數，確定其濃度；

2.2.）將四條單鏈DNA以等比例混合于TM緩沖液中，加入三（2-氯乙基）磷酸酯后，轉入聚合酶鏈式反應儀中，在90~98℃下持續(xù)10~15 min后，迅速降溫至0~5℃，得到tsDNA溶液。

2.如權利要求1所述的生物識別探針的構建方法，其特征在于，所述Au@AgNCs溶膠的制備方法包括如下步驟：

1.1）.合成納米金種子；

1.2）.將所述納米金種子與十六烷基三甲基氯化銨進行反應，得到金溶膠；

1.3）.將所述金溶膠與抗壞血酸在40~80℃下進行反應后，加入硝酸銀，反應后得到Au@AgNCs溶膠。

3.如權利要求1所述的生物識別探針的構建方法，其特征在于，所述Au@AgNCs在氧化銦錫導電膜玻璃表面的固定方法為：

將氧化銦錫導電膜玻璃的表面清洗干凈后，浸入到Au@AgNCs溶膠中，靜置1~5 min后取出，用超純水清洗并用氮氣吹干，即可。

4.一種基于權利要求1所述構建方法制備的生物識別探針對核酸內切酶檢測的邏輯運算方法，其特征在于，包括如下步驟：

3.1）制備Au@Ag NC-tsDNA₁₇探針分子和靶分子MicroRNA-21的納米復合物；

3.2）定義當在所述納米復合物中加入核酸內切酶KpnI和/或StuI時，輸入為“1”，當核酸內切酶KpnI或StuI不存在時，輸入為“0”；

3.3）以所述納米復合物LSPR散射λ_max的藍移量?λ_max-blue作為輸出，并設定輸出的臨界值，當?λ_max-blue大于該臨界值時，輸出為“1”，反之，輸出為“0”。

5.一種基于權利要求1中所述構建方法制備的生物識別探針針對MicroRNA-21和核酸內切酶檢測的邏輯運算方法，其特征在于，包括如下步驟：

設定以單個Au@Ag NC-tsDNA₁₇探針分子中加入靶分子MicroRNA-21作為一種輸入，加入核酸內切酶KpnI和StuI作為另一種輸入，以單個Au@Ag NC-tsDNA₁₇探針分子在加入靶分子miR-21和/或核酸內切酶后的的LSPR散射λ_max的紅移量?λ_max-red作為輸出；

設定輸出的臨界值；當?λ_max-red大于所述臨界值時，輸出為“1”；當?λ_max-red小于所述臨界值時，輸出為“0”。