[發(fā)明專利]一種用于鑒別米象和玉米象的引物對、試劑盒及檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711026472.4
• 申請日: 2017-10-27
• 公開（公告）號(hào): CN107604080A
• 公開（公告）日: 2018-01-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳芳;嚴(yán)曉平;張娟
• 申請（專利權(quán)）人: 中儲(chǔ)糧成都糧食儲(chǔ)藏科學(xué)研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/6888
• 分類號(hào): C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 成都市集智匯華知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)51237
• 代理人: 李華,溫黎娟

1.一種用于鑒別米象和玉米象的引物對，其特征在于，引物對1序列為SEQ ID NO.1/2，

SEQ ID NO.1序列為：5’-CTAATTCGGGCAGAACTAGGAA-3’；

SEQ ID NO.2序列為：5’-AGAGGAGGAGAATAGCAGTGATTCTT-3’；

引物對2序列為SEQ ID NO.3/4，

SEQ ID NO.3序列為：5’-GTTCTGATTACTCCCTCCATCA-3’；

SEQ ID NO.4序列為：5’-AATCAACAGAGGCTCCTTCGTGT-3’；

所述引物對1用于鑒別米象，所述引物對2用于鑒別玉米象。

2.一種用于鑒別米象和玉米象的試劑盒，其特征在于，包含權(quán)利要求1所述引物對1或引物對2。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，還包括PCR反應(yīng)緩沖液、DNA聚合酶和DNTP。

4.一種用于鑒別米象和玉米象的的方法，其特征在于，包括步驟

1)提取米象或玉米象DNA作為模板；

2)利用序列為SEQ ID NO.1/2的引物對1或序列為SEQ ID NO.3/4的引物對2為PCR擴(kuò)增引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得擴(kuò)增產(chǎn)物；

3)檢測擴(kuò)增產(chǎn)物。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，步驟1)米象或玉米象取自不同來源地。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，步驟2)PCR反應(yīng)體系為50μL：包括米象或玉米象DNA模板5μL，10×buffer5μL，dNTPs2μL，10×Taq酶1μL，引物對1或引物對2各10μL，引物濃度為10μmol/L。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，步驟2)PCR反應(yīng)條件為95℃預(yù)變性5min；95℃變性30s，61℃退火30s，72℃延伸45s，35個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸7min。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，步驟3)采用瓊脂糖凝膠電泳檢測擴(kuò)增產(chǎn)物，出現(xiàn)分子量484bp的擴(kuò)增條帶，鑒別為米象；出現(xiàn)分子量129bp的擴(kuò)增條帶，鑒別為玉米象。