[發(fā)明專利]膠質(zhì)瘤診斷標(biāo)志物Circ2:23823258|23823569及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711022872.8
• 申請日: 2017-10-27
• 公開（公告）號: CN107557441B
• 公開（公告）日: 2020-06-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 武明花;湯穎;李沛瑤;劉慶;袁健;趙春花;劉洋
• 申請（專利權(quán)）人: 中南大學(xué)湘雅醫(yī)院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 長沙市融智專利事務(wù)所(普通合伙) 43114
• 代理人: 袁靖

本發(fā)明公開了膠質(zhì)瘤診斷標(biāo)志物Circ2:23823258|23823569及應(yīng)用。在本發(fā)明中，首次發(fā)現(xiàn)：膠質(zhì)瘤細(xì)胞所分泌的外泌體對Circ2:23823258|23823569具有明顯的富集作用；同時發(fā)現(xiàn)膠質(zhì)瘤患者血清外泌體中Circ2:23823258|23823569的表達(dá)水平相比于對照組明顯升高(p0.0001)，ROC曲線分析顯示其對膠質(zhì)瘤具有較高診斷價值(AUC＝0.811，p＝0.002，敏感度和特異度分別為66.7％和91.7％)。因此通過檢測膠質(zhì)瘤患者血清外泌體中Circ2:23823258|23823569的表達(dá)水平，可對膠質(zhì)瘤患者做出早期、快速的無創(chuàng)性診斷。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種用于膠質(zhì)瘤診斷的血清circRNA標(biāo)志物Circ2:23823258|23823569、以及檢測該標(biāo)志物的試劑用于制備膠質(zhì)瘤診斷制劑的應(yīng)用、還有試劑盒。

背景技術(shù)

腦膠質(zhì)瘤是顱內(nèi)最常見的惡性神經(jīng)上皮細(xì)胞腫瘤，占顱內(nèi)腫瘤的40.49％，是成人最常見的腦部腫瘤之一。從確診開始，腦膠質(zhì)瘤患者平均生存壽命不超過五年。目前膠質(zhì)瘤的治療技術(shù)多樣，但由于腫瘤浸潤侵襲速度快，以及對放化療介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡不敏感等特性，總體治療效果不佳，復(fù)發(fā)率高，預(yù)后差，因此尋找新的治療靶點和預(yù)后指標(biāo)至關(guān)重要。目前膠質(zhì)瘤診斷仍然處于以臨床、病理學(xué)和影像學(xué)信息為基礎(chǔ)的經(jīng)驗性階段，而且一經(jīng)診斷，絕大多數(shù)均為中晚期，術(shù)后生存率不容樂觀。因此，尋找膠質(zhì)瘤診斷標(biāo)志物對高危人群進(jìn)行篩查，并相應(yīng)地選擇合理的后續(xù)治療方案，提高生存率，是神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域亟待解決研究任務(wù)。

circRNA是一類不同于線性RNA，廣泛且多樣地存在于哺乳動物細(xì)胞中的內(nèi)源性封閉環(huán)狀非編碼RNA分子，其結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，不易受RNA外切酶影響，能在轉(zhuǎn)錄，轉(zhuǎn)錄后，翻譯等水平多層次調(diào)控基因表達(dá)，廣泛存在于各類細(xì)胞中，腦部豐度極高。circRNA近年來已成為非編碼RNA領(lǐng)域的新熱點。隨著深度測序技術(shù)的廣泛應(yīng)用和生物物理和信息學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，人們發(fā)現(xiàn)人類許多外顯子的轉(zhuǎn)錄本可被非線性地反向剪接或通過基因重排而形成circRNA，且它們在所有剪接轉(zhuǎn)錄本中占了相當(dāng)大的比例，并具有豐富性、穩(wěn)定性、高保守性和時空特異性等特征，有作為諸多疾病分子標(biāo)志物的潛力。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的第一個目的是：提供一種用于膠質(zhì)瘤診斷的血清外泌體CircRNA標(biāo)志物。

主要內(nèi)容包括：一種用于膠質(zhì)瘤診斷的血清外泌體CircRNA標(biāo)志物Circ2:23823258|23823569，其序列如SEQ NO:1所示。

本發(fā)明的第二個目的是，提供檢測所述的CircRNA標(biāo)志物在血清外泌體中表達(dá)量的試劑在制備膠質(zhì)瘤診斷制劑中的應(yīng)用。

本發(fā)明的第三個目的是，提供一種膠質(zhì)瘤診斷試劑盒，其能夠測定血清外泌體中的Circ2:23823258|23823569的含量。

所述的膠質(zhì)瘤診斷試劑盒，含有檢測Circ2:23823258|23823569含量的PCR引物。優(yōu)選引物的序列如SEQ NO:2和3所示。

所述的膠質(zhì)瘤診斷試劑盒，除Circ2:23823258|23823569的引物外，還含有從血清中提取外泌體、由外泌體中提取RNA并進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄及熒光定量PCR的所有試劑。

包括：

(1)提取血清外泌體所需試劑：Total Exosome Isolation Reagent(fromserum)，可由Invitrogen公司購得，貨號4478360；

(2)提取外泌體RNA所需試劑：Trizol試劑、三氯甲烷、異丙醇、75％乙醇、無酶水；

(3)逆轉(zhuǎn)錄所需試劑：隨機引物(Random Primer)、無酶水、5×逆轉(zhuǎn)錄緩沖液、三磷酸堿基脫氧核苷酸、RNA酶抑制劑、MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶；