[發明專利]膠質瘤診斷標志物Circ6:22020339|22020542及應用

有效

• 申請號: 201711022778.2
• 申請日: 2017-10-27
• 公開（公告）號: CN107557471B
• 公開（公告）日: 2020-06-05
• 發明（設計）人: 李沛瑤;武明花;孟舒娟;劉強;陳瓊;余志斌;張嚴
• 申請（專利權）人: 中南大學湘雅醫院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886
• 代理公司: 長沙市融智專利事務所(普通合伙) 43114
• 代理人: 袁靖

本發明公開了膠質瘤診斷標志物Circ6:22020339|22020542及應用，在本發明中，首次發現：膠質瘤細胞所分泌的外泌體對Circ6:22020339|22020542具有明顯的富集作用；同時發現膠質瘤患者血清外泌體中Circ6:22020339|22020542的表達水平相比于對照組明顯降低(p0.0001)，ROC曲線分析顯示其對膠質瘤具有較高診斷價值(AUC＝0.986，p0.0001，敏感度和特異度分別為100％和92.9％)。因此通過檢測膠質瘤患者血清外泌體中Circ6:22020339|22020542的表達水平，可對膠質瘤患者做出早期、快速的無創性診斷。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種用于膠質瘤診斷的血清circRNA標志物Circ6:22020339|22020542、以及檢測該標志物的試劑用于制備膠質瘤診斷制劑的應用、還有試劑盒。

背景技術

腦膠質瘤是顱內最常見的惡性神經上皮細胞腫瘤，占顱內腫瘤的40.49％，是成人最常見的腦部腫瘤之一。從確診開始，腦膠質瘤患者平均生存壽命不超過五年。目前膠質瘤的治療技術多樣，但由于腫瘤浸潤侵襲速度快，以及對放化療介導的細胞凋亡不敏感等特性，總體治療效果不佳，復發率高，預后差，因此尋找新的治療靶點和預后指標至關重要。目前膠質瘤診斷仍然處于以臨床、病理學和影像學信息為基礎的經驗性階段，而且一經診斷，絕大多數均為中晚期，術后生存率不容樂觀。因此，尋找膠質瘤診斷標志物對高危人群進行篩查，并相應地選擇合理的后續治療方案，提高生存率，是神經科學領域亟待解決研究任務。

circRNA是一類不同于線性RNA，廣泛且多樣地存在于哺乳動物細胞中的內源性封閉環狀非編碼RNA分子，其結構穩定，不易受RNA外切酶影響，能在轉錄，轉錄后，翻譯等水平多層次調控基因表達，廣泛存在于各類細胞中，腦部豐度極高。circRNA近年來已成為非編碼RNA領域的新熱點。隨著深度測序技術的廣泛應用和生物物理和信息學技術的快速發展，人們發現人類許多外顯子的轉錄本可被非線性地反向剪接或通過基因重排而形成circRNA，且它們在所有剪接轉錄本中占了相當大的比例，并具有豐富性、穩定性、高保守性和時空特異性等特征，有作為諸多疾病分子標志物的潛力。

發明內容

本發明的第一個目的是：提供一種用于膠質瘤診斷的血清外泌體CircRNA標志物。

主要內容包括：一種用于膠質瘤診斷的血清外泌體CircRNA標志物Circ6:22020339|22020542，其序列如SEQ NO:1所示。

本發明的第二個目的是，提供檢測所述的CircRNA標志物在血清外泌體中表達量的試劑在制備膠質瘤診斷制劑中的應用。

本發明的第三個目的是，提供一種膠質瘤診斷試劑盒，其能夠測定血清外泌體中的Circ6:22020339|22020542的含量。

所述的膠質瘤診斷試劑盒，含有檢測Circ6:22020339|22020542含量的PCR引物。優選引物的序列如SEQ NO:2和3所示。

所述的膠質瘤診斷試劑盒，除Circ6:22020339|22020542的引物外，還含有從血清中提取外泌體、由外泌體中提取RNA并進行逆轉錄及熒光定量PCR的所有試劑。

包括：

(1)提取血清外泌體所需試劑：Total Exosome Isolation Reagent(fromserum)，可由Invitrogen公司購得，貨號4478360；

(2)提取外泌體RNA所需試劑：Trizol試劑、三氯甲烷、異丙醇、75％乙醇、無酶水；

(3)逆轉錄所需試劑：隨機引物(Random Primer)、無酶水、5×逆轉錄緩沖液、三磷酸堿基脫氧核苷酸、RNA酶抑制劑、MMLV逆轉錄酶；