[發明專利]膠質瘤預后標志物circ19:5604583|5604936的應用

在審

• 申請號: 201711022747.7
• 申請日: 2017-10-27
• 公開（公告）號: CN107604071A
• 公開（公告）日: 2018-01-19
• 發明（設計）人: 武明花;佘曉玲;李沛瑤;孟舒娟;孫英男;劉長紅;劉濤
• 申請（專利權）人: 中南大學湘雅醫院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 長沙市融智專利事務所43114
• 代理人: 袁靖

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種用于膠質瘤預后的circRNA標志物的應用。

背景技術

膠質瘤亦稱神經膠質細胞瘤，包括多種發生于神經外胚層細胞的腫瘤，國內報告約占顱內腫瘤的35.26％～60.96％(平均44.69％)。其分類尚缺乏統一意見，近來文獻上常依其惡性程度分為低分級和高分級二種。低分級膠質瘤約占顱內腫瘤的10％～15％，包括一一般病理學分類的I～Ⅱ級星形細胞瘤、毛細胞型及肥胖細胞型星形細胞瘤、纖維型及原漿型星形細胞瘤、輕度間變性星形細胞瘤、少支膠質瘤及神經節膠質瘤等；生存時間約為5～10年，5％～50％可達10年以上，30％病例有惡性升級的經歷。高分級膠質瘤亦稱惡性膠質瘤，包括一般病理學分類的Ⅲ～Ⅳ級星形細胞瘤、多形性膠質母細胞瘤、惡性間變性星形細胞瘤或少枝膠質瘤、髓母細胞瘤等，生存時間約為1年，且多在治療后數月復發，治療上應采用綜合療法，包括手術切除、放射治療及化學治療等，療效很難令人滿意.是一種常見的危害人類健康的疾病，是目前神經外科的難題和醫學研究的重要課題之一。因此，尋找膠質瘤預后標志物對患者進行預后分析，以提高膠質瘤患者的術后生活質量，并相應地選擇合理的后續治療方案，提高生存率，是神經科學領域亟待解決研究任務。

circRNA是一類廣泛且多樣地存在于哺乳動物細胞中、具有調控基因表達作用的內源性非編碼RNA分子，具有共價閉合的環形結構，廣泛存在于各種細胞中，也是繼microRNA(miRNA)后RNA家族的最新研究熱點。近年來，隨著深度測序技術的廣泛應用和生物物理和信息學技術的快速發展，人們發現人類許多外顯子的轉錄本可被非線性地反向剪接或通過基因重排而形成circRNA，且它們在所有剪接轉錄本中占了相當大的比例，并具有豐富性、穩定性、高保守性和時空特異性等特征，有作為諸多疾病分子標志物的潛力。

發明內容

本發明的目的是提供檢測CircRNA標志物circ19:5604583|5604936在腦組織中表達量的試劑在制備膠質瘤預后制劑中的應用，CircRNA標志物序列如SEQ NO:1所示。

所述的檢測腦組織中circ19:5604583|5604936表達量的試劑為實時熒光定量PCR檢測試劑。

所述的實時熒光定量PCR檢測試劑包括進行實時熒光定量PCR的特異性引物，序列如SEQ NO:2和3所示。

所述的實時熒光定量PCR檢測試劑為試劑盒，

所述的試劑盒，除circ19:5604583|5604936的引物外，還含有從腦組織中提取RNA并進行逆轉錄及熒光定量PCR的所有試劑。包括：

(1)從膠質瘤組織中抽提總RNA所用試劑，包括RNA穩定溶液、Trizol試劑、三氯甲烷、異丙醇、無酶水；

(2)以總RNA為模板將circ19:5604583|5604936逆轉錄為cDNA所用試劑，包括逆轉錄緩沖液、三磷酸堿基脫氧核苷酸、RNA酶抑制劑、MMLV逆轉錄酶以及circ19:5604583|5604936所用隨機引物；

(3)將cDNA實時定量PCR所用試劑，包括circRNAcirc19:5604583|5604936實時熒光定量PCR特異性引物、GAPDH內參特異性PCR引物、實時熒光定量SYBR染料、無酶水。

申請人通過熒光定量PCR與生存曲線分析發現膠質瘤組織來源的circRNA circ19:5604583|5604936與患者的生存率相關，含量越高，生存率越高。此法為膠質瘤的預后分析提供了強有力的技術支持，有助于提高膠質瘤患者的術后生活質量，制訂術后治療方案，提高生存率，具有深遠的臨床意義和推廣性。

附圖說明

圖1為實時熒光定量PCR分析circ19:5604583|5604936在正常腦組織與膠質瘤中的表達差異；

圖2為生存曲線分析膠質瘤組織來源的circ19:5604583|5604936表達高低對膠質瘤患者的預后影響。

具體實施方式

以下結合實施例旨在進一步說明本發明，而非限制本發明。

實施例1制備檢測circRNA circ19:5604583|5604936表達量的試劑用于制備膠質瘤患者預后的試劑盒(50次反應)

1.RNA穩定溶液50ml

2.異丙醇100ml

3.三氯甲烷100ml

4.Trizol 50ml

5.無酶水10ml

6. 1μM隨機逆轉錄引物50μl

7. 5×逆轉錄緩沖液200ml