[發明專利]一種基于核酸外切酶III的汞離子檢測探針組、試劑盒及汞離子檢測方法

有效

• 申請號: 201711022576.8
• 申請日: 2017-10-27
• 公開（公告）號: CN107586827B
• 公開（公告）日: 2020-03-13
• 發明（設計）人: 張何;王青;傅昕;張潔
• 申請（專利權）人: 湖南工程學院
• 主分類號: C12Q1/682
• 分類號: C12Q1/682;C12Q1/6876
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

1.一種基于核酸外切酶III的汞離子檢測探針組，其特征在于，包括發夾DNA探針和汞離子識別探針；

所述發夾DNA探針為3’末端為單鏈游離端的莖環結構，由G-四鏈體形成序列、互補序列和3’末端單鏈游離序列組成；所述G-四鏈體形成序列的5’端部分序列和5’端上游序列與G-四鏈體形成序列的3’端下游序列通過互補序列形成莖狀區，所述發夾DNA探針的3’末端含2組重復序列，一組處于莖狀區，另一組為3’末端單鏈游離序列；所述3’末端單鏈游離序列含有2～4個連續的T堿基；所述發夾DNA探針的序列如SEQ ID NO.1所示；

所述汞離子識別探針5’端含有2～4個連續的T堿基，所述T堿基在汞離子存在的情況下能夠與發夾DNA探針3’末端單鏈游離序列中的T堿基形成T-Hg²⁺-T結構，且在所述發夾DNA探針的3’末端形成平末端；所述汞離子識別探針的序列如SEQ ID NO.2所示。

2.基于權利要求1所述探針組的汞離子檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權利要求1所述的探針組和核酸外切酶III。

3.基于權利要求1所述探針組或權利要求2所述試劑盒的汞離子檢測方法，包括以下步驟：

1)將所述發夾DNA探針和汞離子識別探針混合于Tris-HCl緩沖液中，90℃保持10～20min，冷卻后，加入待測樣品和核酸外切酶III，25℃自循環反應60～100min；

2)將所述步驟1)的自循環反應產物在80℃處理10min，使核酸外切酶III失活，得到失活體系；

3)在所述步驟2)的失活體系中加入血紅素和ABTS-H₂O₂，產生G-四鏈體-血紅素DNA酶，催化ABTS-H₂O₂反應，生成ABTS^·+，對汞離子進行吸光度檢測。

4.根據權利要求3所述的檢測方法，其特征在于，步驟1)所述冷卻的條件為：70℃保持10～15min；50℃保持25～30min；30℃保持10～15min；20～25℃保持20～30min。

5.根據權利要求3所述的檢測方法，其特征在于，步驟1)發夾DNA探針在自循環反應體系中的濃度為0.10～0.25μM；汞離子識別探針在自循環反應體系中的濃度為0.03～0.10μM；發夾DNA探針和汞離子識別探針混合的濃度比為5∶(1～3)。

6.根據權利要求3所述的檢測方法，其特征在于，步驟1)核酸外切酶III在自循環反應體系中的濃度為0.10～0.20U/μL；發夾DNA探針與核酸外切酶III的體積比為(25～100)∶1。

7.根據權利要求3所述的檢測方法，其特征在于，步驟3)催化ABTS-H₂O₂反應的催化條件為37℃反應8min。

8.根據權利要求3所述的檢測方法，其特征在于，步驟3)所述吸光度檢測為在420nm波長下進行。