[發明專利]亮膚肽的液相合成方法

有效

• 申請號: 201711022467.6
• 申請日: 2017-10-26
• 公開（公告）號: CN107652355B
• 公開（公告）日: 2021-06-04
• 發明（設計）人: 陳科;李晨;王慧嘉;郭添;張忠旗;楊小琳;趙金禮
• 申請（專利權）人: 陜西慧康生物科技有限責任公司
• 主分類號: C07K5/117
• 分類號: C07K5/117;C07K1/02;C07K1/06
• 代理公司: 西安永生專利代理有限責任公司 61201
• 代理人: 高雪霞

1.一種亮膚肽的液相合成方法，其特征在于：采用液相合成法分別合成Pro-Lys的全保護片段Boc-Pro-Lys(Boc)-OH以及Glu-Lys的全保護片段H-Glu(tBu)- Lys(Boc)-OH，再將這兩個全保護片段進行縮合，得到全保護四肽Boc-Pro-Lys(Boc) -Glu(tBu)-Lys(Boc)-OH，然后對全保護四肽進行脫保護，得到亮膚肽；

上述Boc-Pro-Lys(Boc)-OH的合成方法為：以四氫呋喃為溶劑，將Boc-Pro-OH與N,N′-二環己基碳酰亞胺、N-羥基丁二酰亞胺在0～10℃下反應3～5小時，過濾，向濾液中加入H-Lys(Boc)-OH和碳酸氫鈉水溶液，在0～10℃下繼續反應0.5～2小時，然后升溫至室溫反應8～16小時，反應完后過濾，濾液減壓脫除溶劑后倒入水中，用檸檬酸水溶液調節溶液pH值至析出大量白色固體，過濾，水洗，真空干燥，得到Boc-Pro-Lys(Boc)-OH；

上述H-Glu(tBu)-Lys(Boc)-OH的合成方法為：以四氫呋喃為溶劑，將Fmoc-Glu(tBu)-OH與1-羥基苯并三氮唑、有機堿、N,N′-二環己基碳酰亞胺在-10～-5℃下反應2～4小時，過濾，向濾液中加入H-Lys(Boc)-OH和有機堿，在15～25℃下反應10～18小時，減壓脫除溶劑后倒入水中，用檸檬酸水溶液調節溶液pH值至析出大量白色固體，過濾，水洗，真空干燥，得到Fmoc-Glu(tBu)-Lys(Boc)-OH，然后用哌啶/N,N-二甲基甲酰胺溶液脫除Fmoc-Glu(tBu)-Lys(Boc)-OH中的Fmoc保護基，分離純化即得H-Glu(tBu)-Lys(Boc)-OH；其中，所述的有機堿為N-甲基嗎啡啉、二異丙基二乙胺、N-甲基吡咯烷酮中任意一種。

2.根據權利要求1所述的亮膚肽的液相合成方法，其特征在于：所述Boc-Pro-Lys(Boc)-OH的合成方法中，Boc-Pro-OH、N,N′-二環己基碳酰亞胺、N-羥基丁二酰亞胺、H-Lys(Boc)-OH、碳酸氫鈉的摩爾比為1:（1.5～2.0）:（1.2～1.5）:（1.2～1.5）:（2.0～4.0）。

3.根據權利要求1所述的亮膚肽的液相合成方法，其特征在于：所述H-Glu(tBu)-Lys(Boc)-OH的合成方法中，Fmoc-Glu(tBu)-OH與N,N′-二環己基碳酰亞胺、1-羥基苯并三氮唑、有機堿、H-Lys(Boc)-OH的摩爾比為1:（1.0～1.25）: （1.05～1.3）:（2.0～4.0）:（1.1～1.4）。

4.根據權利要求1所述的亮膚肽的液相合成方法，其特征在于所述縮合的方法為：以二氯甲烷為溶劑，將Boc-Pro-Lys(Boc)-OH與有機堿、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽、1-羥基苯并三氮唑在-20～-10℃下反應20～30分鐘，然后加入H-Glu(tBu)-Lys(Boc)-OH的N,N-二甲基甲酰胺溶液，繼續反應1～2小時后升溫至室溫反應8～14小時，分離純化，得到全保護四肽Boc-Pro-Lys(Boc)-Glu(tBu)-Lys(Boc)-OH。

5.根據權利要求4所述的亮膚肽的液相合成方法，其特征在于：所述Boc-Pro-Lys(Boc)-OH與1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽、1-羥基苯并三氮唑、有機堿、H-Glu(tBu)-Lys(Boc)-OH的摩爾比為1:（1.0～1.1）:（1.0～1.15）:（2.0～4.0）:（0.8～0.95）。

6.根據權利要求1所述的亮膚肽的液相合成方法，其特征在于：采用三氟乙酸對全保護四肽進行脫保護。