[發(fā)明專利]一種數(shù)字PCR濃度計算方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201711022118.4 | 申請日： | 2017-10-27 |
| 公開（公告）號： | CN107622185B | 公開（公告）日： | 2020-08-21 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 程標 | 申請（專利權(quán)）人： | 領(lǐng)航基因科技(杭州)有限公司 |
| 主分類號： | G16B40/30 | 分類號： | G16B40/30 |
| 代理公司： | 杭州求是專利事務(wù)所有限公司 33200 | 代理人： | 黃歡娣;邱啟旺 |
| 地址： | 310020 浙江省杭州市江*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 數(shù)字 pcr 濃度 計算方法 | ||
1.一種數(shù)字PCR濃度計算方法，其特征在于，該方法根據(jù)PCR擴增過程中實時熒光定量曲線的擴增周期Ct值并結(jié)合實時聚類方法，確定計算反應物初始濃度；
所述數(shù)字PCR濃度計算方法，包括以下步驟：
(1)確定兩個熒光閾值R11、R22，R11R22，熒光閾值R11、R22缺省設(shè)置包含3～20個循環(huán)周期的熒光信號標準偏差的3～15倍，起始周期為第2～10個循環(huán)周期，結(jié)束周期為第10～25個循環(huán)周期；或為第Cn個周期的熒光強度值，第Cn個周期的熒光強度值滿足：
其中Cn代表擴增周期，R是對應擴增周期的熒光強度值；
(2)熒光閾值R11與每個陽性反應單元擴增曲線在指數(shù)增長期都有一個交點，該交點對應相應的擴增周期值Cti；根據(jù)Cti進行聚類，獲得k個聚類，每個聚類對應的中心值從大到小依次為M1，M2，……，Mk；第j個聚類中包含的擴增周期值Cti的數(shù)量為Sj；
(3)計算擴增效率平均值：ηi為第i個反應單元的反應效率，n為反應單元個數(shù)，
RB為本底熒光值，ci1,ci2分別為是熒光閾值R11、R22與第i個反應單元的擴增曲線的交點所對應的擴增周期，c2＞c1；
(4)反應物初始濃度C為：
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