[發明專利]檢測人Wnt1基因突變的引物組及其試劑盒

在審

• 申請號: 201711021800.1
• 申請日: 2017-10-26
• 公開（公告）號: CN107868821A
• 公開（公告）日: 2018-04-03
• 發明（設計）人: 魯艷芹;任秀智;王延宙;張遙;代運章;翟乃祥
• 申請（專利權）人: 山東省醫藥生物技術研究中心
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 濟南金迪知識產權代理有限公司37219
• 代理人: 朱家富

1.一種用于檢測Wnt1基因突變的引物組，該引物組包括4對特異性擴增Wnt1基因第1至第19外顯子的引物；

所述的Wnt1基因外顯子1的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的引物FP1與核苷酸序如SEQ ID NO.2所示的引物RP1；

所述的Wnt1基因外顯子2的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的引物FP2與核苷酸序如SEQ ID NO.4所示的引物RP2；

所述的Wnt1基因外顯子3的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的引物FP3與核苷酸序如SEQ ID NO.6所示的引物RP3；

所述的Wnt1基因外顯子4的PCR擴增引物，包括核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示的引物FP4與核苷酸序如SEQ ID NO.8所示的引物RP4。

2.一種用于檢測Wnt1基因突變的測序引物組，該引物組包括4條第1至第4外顯子的測序引物引物；包括：

外顯子1的PCR測序引物核苷酸序列為SEQ ID NO.1的引物FP1；

外顯子2的PCR測序引物核苷酸序列為SEQ ID NO.3的引物FP2；

外顯子3的PCR測序引物核苷酸序列為SEQ ID NO.5的引物FP3；

外顯子4的PCR測序引物核苷酸序列為SEQ ID NO.7的引物FP4。

3.一種用于檢測Wnt1基因突變的試劑盒，其特征在于，包括：

權利要求1所述用于檢測Wnt1基因突變的由第1至第4外顯子的PCR擴增引物組成的引物組；

PCR擴增試劑；

PCR產物純化試劑；

含有權利要求2所述用于檢測Wnt1基因突變的測序引物組的DNA測序試劑。

4.如權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述PCR擴增試劑包括：2.5mM dNTP，含Mg²⁺的10×PCR緩沖液，5U/μl Taq DNA聚合酶，去RNase與DNase水；

所述PCR擴增體系中各組分的工作濃度為：200μM dNTP，1×PCR緩沖液，0.025U/μl Taq DNA聚合酶，上游引物和下游引物均為0.4μM，模板濃度為2.5～5ng/μl。

5.如權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述PCR產物純化試劑包括：1U/μl SAP酶、10U/μl ExoI酶、去RNase與DNase水；

PCR產物純化體系中各組分的工作濃度為：0.05U/μl SAP酶、0.5U/μl ExoI酶。

6.如權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述DNA測序試劑包括：上述用于檢測Wnt1基因突變的測序引物組、BigDye 3.1混合液、0.125M EDTA溶液、無水乙醇、體積百分比75％乙醇溶液、Hi-Di甲酰胺溶液、去RNase與DNase水。

7.如權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述測序引物中的測序引物的工作濃度為0.64pMol/L。