[發(fā)明專利]一種鑒定易成花荔枝種質(zhì)資源的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711020932.2
• 申請(qǐng)日: 2017-10-26
• 公開（公告）號(hào): CN107586875A
• 公開（公告）日: 2018-01-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 丁峰;張樹偉;彭宏祥;陳厚彬
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京中譽(yù)威圣知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司11279
• 代理人: 朱志寬

1.一種鑒定易成花荔枝種質(zhì)資源的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)收集不同荔枝種質(zhì)資源，并提取它們的DNA；

(2)荔枝LcFT1基因啟動(dòng)子有兩個(gè)類型，分別為“EFT”型和“DFT”型，且含有“EFT”型啟動(dòng)子的荔枝種質(zhì)資源容易成花；

根據(jù)LcFT1基因“EFT”型啟動(dòng)子的特異性設(shè)計(jì)一對(duì)上下游引物EFT-F和EFT-R，PCR擴(kuò)增的目的條帶大小為262bp，其具有如Seq ID NO.5所示的序列，用于檢測(cè)LcFT1基因“EFT”型啟動(dòng)子；

根據(jù)LcFT1基因“DFT”型啟動(dòng)子的特異性設(shè)計(jì)一對(duì)上下游引物DFT-F和DFT-R，PCR擴(kuò)增的目的條帶大小為202bp，其具有如Seq ID NO.6所示的序列，用于檢測(cè)LcFT1基因“DFT”型啟動(dòng)子；

(3)PCR擴(kuò)增檢測(cè)：分別以待檢測(cè)荔枝種質(zhì)資源的DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物經(jīng)1.5％濃度的瓊脂糖電泳檢測(cè)；

(4)易成花荔枝種質(zhì)資源的鑒定：如果通過引物EFT-F和EFT-R擴(kuò)增到262bp大小的目的條帶，通過引物DFT-F和DFT-R擴(kuò)增不到202bp大小的目的條帶，則表明待檢測(cè)荔枝為純合“EFT”型易成花荔枝種質(zhì)資源；如果通過引物EFT-F和EFT-R擴(kuò)增到262bp大小的目的條帶，通過引物DFT-F和DFT-R擴(kuò)增到202bp大小的目的條帶，則表明待檢測(cè)荔枝為雜合型易成花荔枝種質(zhì)資源。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鑒定易成花荔枝種質(zhì)資源的方法，其特征在于，步驟(2)中所述的引物EFT-F為Seq ID NO.1所示的序列，所述的引物EFT-R為Seq ID NO.2所示的序列，所述的引物DFT-F為Seq ID NO.3所示的序列，所述的引物DFT-R為Seq ID NO.4所示的序列。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鑒定易成花荔枝種質(zhì)資源的方法，其特征在于，步驟(3)中所述的PCR擴(kuò)增的反應(yīng)體系具體組成如下：DNA模板1μL，2×Taq PCR MasterMix(TIANGEN)12.5μL，上下游引物各1μL，水9.5μL，共25μL。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的鑒定易成花荔枝種質(zhì)資源的方法，其特征在于，所述的上游引物為Seq ID NO.1或Seq ID NO.3所示的序列，所述的下游引物為Seq ID NO.2或Seq ID NO.4所示的序列。