[發明專利]一種金針菇母種保藏的培養基配方及方法

在審

• 申請號: 201711015078.0
• 申請日: 2017-10-25
• 公開（公告）號: CN107653192A
• 公開（公告）日: 2018-02-02
• 發明（設計）人: 李林輝;李冰寒;李奇緣
• 申請（專利權）人: 西華師范大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N1/04;C12R1/645
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識產權代理有限公司11385
• 代理人: 董芙蓉

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種金針菇母種保藏的培養基配方及方法。

背景技術

金針菇[Flammulina velutipes(Fr)sing.]又稱樸菇、構菌、冬菇、毛柄小火菇、金菇、增智菇等。在分類上,金針菇隸屬于真菌門，擔子菌亞門，層菌綱，傘菌目，口蘑科，小火焰菌屬。

金針菇的營養成分豐富，含有豐富的粗蛋白、碳水化合物、粗脂肪、粗纖維、煙酸、礦質元素如鐵、鈣、磷、鈉等.其中蛋白質中含有人體必需的8種氨基酸，其中賴氨酸和精氨酸含量極為豐富，具有促進兒童智力發育的重要作用。另外金針菇富含多糖,其中以葡聚糖的量最多。金針菇多糖類物質對保護預防肝臟損傷起到了很好的保護作用,并且能有效地抑制Lewi肺癌,小鼠腫瘤Heps和H22，S180及L615，是一種抗腫瘤和抗白血病的有效物質.金針菇中還含有多種功能性蛋白,如真菌免疫調節蛋白(FIP)、核糖體失活蛋白(RIPs)、金針菇毒素(FTX)等。被證實具有抗腫瘤的作用。

金針菇是國內外廣泛栽培的一種食用菌品種，現在生產的金針菇，幾乎都是工廠化栽培產品。這些公司，投資大，運行成本高，需要在生產以及流通的每一個環節降低成本，同時，更需要保證金針菇生產有較高的生物學效率，這樣，企業才有競爭能力。據調查與反映，一個優良的金針菇品種，傳3-5代后，其生產性能即生物學效率開始下降。于是，多數公司開始購買新菌種，但新購買的新菌種，生產性能并不能得到保證與穩定。致使有的企業，虧損嚴重。也有從國外引進菌種的，但每年一支母種，價格近百萬。對于較小規模的種植戶，是承受不起的。所以，對于大多數金針菇種植戶來講，對于目前用到的心儀品種，總想長久地用下去，發揮菌種的優良生產性能。但食用菌菌種的保存，與農作物種子保存干種子的方式不一樣，其特點是保存在含有培養基質的玻璃試管內，等到用時，再傳代轉接，這樣的無性繁殖，導致菌種生產性能退化嚴重。大多數種植戶，沒有恰當的菌種傳代以及保藏方法，反復奔波于新菌種的試用中，而生產性能極不穩定，因此，尋找一種金針菇母種保藏辦法，維持金針菇菌種的高效穩定生產性能，對于中小金針菇種植戶很有必要。

金針菇母種保藏一般采用PDA試管低溫傳代保藏，在多次傳代后菌種分解纖維素和木質素等有機養料的能力下降甚至嚴重退化，菌種不能繼續使用。金針菇菌種保持持續的分解利用纖維素、木質素這類食用菌栽培培養料的能力即高效的纖維素酶、漆酶分泌能力是金針菇生產者最關注的，否則，原料不能被充分利用，生產效益就會低下。為解決這個問題有人將玉米粉、豆粉等有機養料加入培養基，但這些養料容易沉積在試管底部不被利用或者菌絲長勢弱，不能誘導纖維素酶、漆酶的產生，對于維持菌種的生產性能穩定效果并不理想，尋找一種高效的能保證金針菇母種優良生產性能的培養基及方法，對于金針菇生產行業迫在眉睫。

發明內容

本發明的目的在于克服金針菇母種現有保藏技術中存在的缺陷，提供一種金針菇母種保藏的培養基配方及方法，達到穩定金針菇母種的生產性能。

其具體技術方案為：

1制備兩種金針菇母種保藏培養基

一種是常規PDA培養基：配方為土豆200g，葡萄糖20g，瓊脂20g，自來水1000ml，pH自然。

具體做法如下：挑選新鮮的土豆，削皮，切成黃豆大小顆粒狀，加水煮沸30min。過濾后取濾液，加入瓊脂熬煮沸騰后，加入葡萄糖，攪拌均勻，分裝試管。121℃滅菌20min，擺斜面。待培養基凝固后，即可傳接母種。

另一種是改良PDA培養基：配方為土豆100g，葡萄糖10g，蛋白胨1g，酵母膏0.5g，羧甲基纖維素鈉5g，愈創木酚0.5g，磷酸二氫鉀3g，硫酸鎂1.5g，瓊脂粉20g，水1000ml，pH自然。

具體做法如下：挑選新鮮的土豆，削皮，切成黃豆大小顆粒狀，加水煮沸30min。過濾后取濾液，加入蛋白胨、酵母膏、羧甲基纖維素鈉、愈創木酚、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、瓊脂熬煮沸騰并全部溶解后，再加入葡萄糖，攪拌均勻，分裝試管。121℃滅菌20min，擺斜面。待培養基凝固后，即可傳接母種。

2金針菇母種傳代時培養基的交替使用與保藏方法

金針菇母種的傳代保存采用上面提供的常規PDA培養基與改良PDA培養基并交替使用，即奇數代用常規PDA培養基接種培養，長滿菌絲體后低溫保藏；而偶數代用改良PDA培養基接種培養，長滿菌絲體后低溫保藏。

與現有技術相比，本發明的有益效果：