[發明專利]用于從hPSC生成胰腺祖細胞和功能性β細胞的方法和組合物

有效

• 申請號: 201711013526.3
• 申請日: 2013-04-30
• 公開（公告）號: CN108004199B
• 公開（公告）日: 2022-03-18
• 發明（設計）人: 凱勒·G;諾斯特羅·M·C;霍爾特辛格爾·A;薩蘭奇·F
• 申請（專利權）人: 大學健康網絡
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12N5/02;C12N5/073;C12Q1/02
• 代理公司: 北京瑞恒信達知識產權代理事務所(普通合伙) 11382
• 代理人: 曹津燕;張偉

1.一種從內胚層細胞群產生NKX6-1+胰腺祖細胞的方法，所述方法包括使所述內胚層細胞群與至少一種EGF組分和至少一種煙酰胺組分的組合接觸至少3天，以誘導所述內胚層細胞群的至少一部分分化為NKX6-1+胰腺祖細胞，并且富集或分離NKX6-1陽性細胞群，

其中所述EGF組分包含Betacellulin和/或其活性變體和/或活性片段；

其中所述煙酰胺組分包含煙酰胺、其鹽、溶劑化物和綴合物；聚ADP-核糖合成酶抑制劑；和/或其兩種或更多種的組合；

其中所述內胚層細胞群不是從人胚胎獲得的；和

所述富集或分離步驟包括使所述細胞群與HPx表位檢測抗體接觸，和分離或部分地純化與HPx1和/或HPx2結合的細胞亞群。

2.根據權利要求1所述的方法，其中，所述組合還包含至少一種Noggin組分，所述至少一種Noggin組分包含以下中的一種或多種：Noggin和/或其活性綴合物和/或活性片段；BMPR1A和/或其活性綴合物和/或活性片段；BMPR1B和/或其活性綴合物和/或活性片段；Dorsomorphin和/或其鹽或溶劑化物；LDN 193189和/或其鹽或溶劑化物；CHORDIN和/或其活性綴合物和/或活性片段；和/或其兩種或更多種的任意組合。

3.根據權利要求2所述的方法，其中，所述Noggin組分為Noggin。

4.根據權利要求1所述的方法，其中，所述聚ADP-核糖合成酶抑制劑包含苯甲酰胺、3-氨基苯甲酰胺和/或其兩種或更多種的組合。

5.根據權利要求1所述的方法，其中，所述煙酰胺組分為煙酰胺和/或其鹽、溶劑化物和/或綴合物。

6.根據權利要求1至5中任一項所述的方法，還包含Exendin-4組分，所述Exendin-4組分包含以下中的一種或多種：Exendin-4和/或其活性綴合物和/或活性片段；GLP-1和/或其活性綴合物和/或活性片段；和/或其兩種或更多種的任何組合。

7.根據權利要求6所述的方法，其中，所述Exendin-4組分為Exendin-4。

8.根據權利要求1至5中任一項所述的方法，其中，所述內胚層細胞群在基本上同時的處理中用所述組合組分處理至少3天、至少4天、至少5天、至少6天、至少7天、至少8天、至少9天、至少10天、至少11天、至少12天、至少13天、至少14天或至少15天。

9.根據權利要求1至5中任一項所述的方法，其中，所述內胚層細胞群分化成NKX6-1+胰腺祖細胞的部分為至少30%。

10.根據權利要求1至5中任一項所述的方法，其還包括將NKX6-1陽性胰腺祖細胞與CD34+內皮細胞共培養。

11.根據權利要求1至5中任一項所述的方法，其中，所述內胚層細胞群分化自多能干細胞（PSC）。

12.根據權利要求11所述的方法，其中，所述PSC為胚胎干細胞（ESC）或誘導性多能干細胞（iPSC）。

13.根據權利要求12所述的方法，其中，所述多能干細胞為人ESC（hESC）或人iPSC（hiPSC）。

14.根據權利要求1至5中任一項所述的方法，首先包括產生內胚層細胞群。