[發明專利]用于多型人乳頭瘤病毒檢測的單克隆抗體

在審

• 申請號: 201711008722.1
• 申請日: 2017-10-25
• 公開（公告）號: CN109705196A
• 公開（公告）日: 2019-05-03
• 發明（設計）人: 肖長義;萬濤;成帆;王樂;李君蓮
• 申請（專利權）人: 三峽大學
• 主分類號: C07K14/025
• 分類號: C07K14/025;C07K16/08;G01N33/68;G01N33/577;G01N33/569
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 韋東

本發明涉及用于多型人乳頭瘤病毒檢測的單克隆抗體。具體而言，本發明首先提供一種分離的多肽，選自：(1)SEQ ID NO:1；(2)SEQ ID NO:1長至少12～21個氨基酸殘基的片段；(3)在(1)和(2)所示序列的N端和/或C端具有1個半胱氨酸殘基的序列；和(4)(1)～(3)所述序列與抗體制備或檢測中用到的載體蛋白形成的融合蛋白。本發明還提供與所述多肽特異性結合的抗體及抗體組合。使用本發明的抗體組合能夠檢測多型HPV。

技術領域

本發明涉及用于多型人乳頭瘤病毒檢測的單克隆抗體。

背景技術

1933年人類首次發現乳頭瘤病毒，1978年，第一例生殖道HPV被鑒定。目前，根據HPV DNA序列表達基因不同，已確定的HPV亞型超過200種，其中，85種HPV的基因克隆被鑒定，另有120種的部分基因型被鑒定，并且有30余種是從生殖道組織中分離得到。

根據HPV感染的部位，分為皮膚型和粘膜型；根據其致病性的大小，分為高危型(High risk，HR)和低危型(Lower risk，LR)。高危型主要有HPV16、18、33、31、58和52等，與宮頸癌的發病有關；低危型主要有HPV6、11、42和44等，與生殖道疣狀物有關。

HPV作為宮頸癌發生的重要致病因素目前已經十分明確，充分利用流行學調查的結果，對制定宮頸HPV感染預防性篩查策略，對指導篩查試劑盒的研制均有重要意義。HPV篩查作為降低宮頸癌發生的重要手段目前是以分子生物學檢測占據主導地位，而且也是目前唯一獲得臨床使用許可的HPV檢測方法。總結現今HPV檢測的研發方向，仍然以分型檢測為主，尤其是專注于如何區分更多的型別。但是，目前的檢測和研究還存在一些問題，比如：分型檢測型別覆蓋的問題，“低?！盚PV感染是否可以忽略的問題，多型別交替感染與多重感染的問題，HPV感染易感個體的問題，機體免疫狀態與HPV感染的問題，等等。全面厘清上述這些問題，對調整HPV預防性篩查試劑盒的研發策略肯定具有重要的幫助。

進行HPV分型檢測的最大目的是區分HPV感染者是HR-HPV還是LR-HPV感染，以此確定宮頸癌的高危人群。近年的流行病調查結果顯示，LR-HPV引起腫瘤的可能性應當引起重視。de Sanjose S等收集了38個國家的浸潤性宮頸癌石蠟標本進行HPV DNA分析檢測。在10575例浸潤癌標本中8977例(85％)檢出HPV DNA陽性，共鑒定出30個型別。最常見的型別分別是HPV16，18，31，33，35，45，52和58型，總共有8196例(91％，95％CI：90～92)。16例標本僅為單一LR-HPV感染，其中HPV6型9例，HPV11型2例，HPV42型共3例，HPV44和HPV74各1例，占宮頸癌總數的0.18％。Correnti M等對150例委內瑞拉婦女的宮頸癌標本進行28個型別HPV分型檢測。在148例DNA陽性標本中，135例HR-HPV感染(91.2％)，1例確定為LR-HPV11感染，占0.7％。與上述結果類似，Alemany L等收集1940～2007年間西班牙816例宮頸鱗狀細胞癌標本進行了25個HPV型別的分型檢測。結果7例為LR-HPV單一感染，其中3例HPV30，2例HPV6和2例HPV26，分別占陽性檢出的0.4％，0.2％和0.2％。以上研究結果表明，單一的LR-HPV感染有可能是宮頸癌發生的唯一病原學因素。

以下的兩項研究中LR-HPV在宮頸癌中的檢出率更高。Alsbeih G等收集沙特阿拉伯100個石蠟包埋的宮頸癌標本，采用Linear Array kit技術進行了HPV分型檢測。結果89例檢測出HPV陽性，11個不同型別得到了確定。其中兩例為單一LR-HPV感染，分別為HPV6、HPV64，占2％。Alibegashvili T等收集了91例格魯吉亞婦女的浸潤癌標本進行分型檢測。先用GP5+/GP6+PCR擴增，陽性產物采用反向線性雜交法進行HPV分型檢測，可以鑒定44個HPV型別。結果HPV的檢出率為100％，其中2例為單純LR-HPV陽性，分別為HPV30、HPV42，占2.2％。綜上所示，多個研究均發現，宮頸癌標本中低危型HPV可以作為唯一被檢出的感染因素，因此不排除低危型別HPV致癌可能性。