[發明專利]一種同時檢測尿液中四個膀胱癌標志物的蛋白芯片

在審

• 申請號: 201711007608.7
• 申請日: 2017-10-25
• 公開（公告）號: CN108414755A
• 公開（公告）日: 2018-08-17
• 發明（設計）人: 吳松;雷崎方;王書鵬
• 申請（專利權）人: 深圳市羅湖區人民醫院
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/68;G01N33/577;G01N33/543;G01N33/532
• 代理公司: 深圳市合道英聯專利事務所(普通合伙) 44309
• 代理人: 廉紅果;謝成毅

1.一種同時檢測尿液中四個膀胱癌標志物的蛋白芯片，其特征在于：所述蛋白芯片為同時含有NMP22微球、BTA微球、CD20微球和TERT微球的蛋白芯片；

所述NMP22微球由嵌入了量子點的膠體金包被微球和與之偶聯的NMP22單克隆抗體組成；

所述BTA微球由嵌入了量子點的膠體金包被微球和與之偶聯的BTA單克隆抗體組成；

所述CD20微球由嵌入了量子點的膠體金包被微球和與之偶聯的CD20單克隆抗體組成；

所述TERT微球由嵌入了量子點的膠體金包被微球和與之偶聯的TERT單克隆抗體組成。

2.一種同時檢測尿液中四個膀胱癌標志物的蛋白芯片，所述蛋白芯片通過下述方法制備：

(一)、膠體金包被原微球的制備及量子點的嵌入；所述量子點具有同一激發波長但發射波長互不相同；

(二)、以NMP22、BTA、CD20和TERT的重組蛋白作為抗原分別制備單克隆抗體；單克隆抗體分別與嵌入量子點的膠體金包被的原微球的偶聯，得到NMP22微球溶液、BTA微球溶液、CD20微球溶液和TERT微球溶液；

(三)、分別取NMP22微球溶液、BTA微球溶液、CD20微球溶液和TERT微球溶液，在電磁攪拌儀的持續攪拌下充分混勻，即得同時檢測尿液中四個膀胱癌標志物的蛋白芯片。

3.根據權利要求2所述的一種同時檢測尿液中四個膀胱癌標志物的蛋白芯片，其特征在于，所述步驟(一)膠體金包被原微球的制備及量子點的嵌入的具體過程為：

(1)、膠體金的制備；

(2)、膠體金包被原微球：在離心管中加入步驟(1)制備所得的膠體金和0.05g微球，充分振蕩混勻后離心，棄去上層液體，沉淀反復用蒸餾水和無水乙醇洗滌后，在室溫下干燥后獲得膠體金包被的原微球；

(3)、將量子點嵌入膠體金包被原微球：取玻璃試管，分別加入2mL量子點氯仿溶液和0.01g步驟(2)制備所得的膠體金包被的原微球，充分振蕩至溶液中幾乎不存在游離的量子點，于通風櫥中待氯仿揮發完全后，將剩下的微球用無水乙醇反復洗滌，在室溫下干燥后獲得在嵌入了量子點的膠體金包被微球。

4.根據權利要求2或3所述的一種同時檢測尿液中四個膀胱癌標志物的蛋白芯片，其特征在于，膠體金制備的具體過程為：將氯金酸配置成0.01％的水溶液，取100mL至250mL燒杯中，加熱至沸騰后，保持沸騰的狀態下加入檸檬酸鈉，當氯金酸水溶液的顏色為穩定的紅色后停止加熱，待紅色水溶液冷卻至室溫后，用蒸餾水恢復至原體積，即得。

5.根據權利要求2所述的一種同時檢測尿液中四個膀胱癌標志物的蛋白芯片，其特征在于，所述步驟(二)中單克隆抗體分別與嵌入量子點的膠體金包被的原微球的偶聯的具體過程為：

(a)、對溶于磷酸緩沖液中的NMP22、BTA、CD20和TERT單克隆抗體，分別進行下述處理：在電磁攪拌儀的持續攪拌下稀釋成濃度為30ug/mL的溶液；

(b)、往步驟(a)中再依次加入1％的吐溫80、0.01g步驟(3)中制備所得的嵌入量子點的膠體金包被的原微球，持續攪拌15min后，加入5％的BSA溶液封閉微球上沒有偶聯完的位點，待封閉完成后，對溶液進行離心，取沉淀用PBS緩沖液反復洗滌后，分別得到偶聯了NMP22單克隆抗體的NMP22微球、偶聯了BTA單克隆抗體的BTA微球，偶聯了CD40單克隆抗體的CD20微球和偶聯了TERT單克隆抗體的TERT微球。