[發明專利]用于腦中風的發光ELISA體液樣品穩定化用水溶液

有效

• 申請號: 201711007044.7
• 申請日: 2017-10-25
• 公開（公告）號: CN109696550B
• 公開（公告）日: 2022-08-26
• 發明（設計）人: 鄧杰;丁維俊;夏巍
• 申請（專利權）人: 成都藍瑙生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N21/64;G01N21/76
• 代理公司: 北京天昊聯合知識產權代理有限公司 11112
• 代理人: 丁業平;常海濤

本發明提供一種用于發光ELISA的體液樣品穩定化用水溶液，該體液樣品中含有神經損傷標志性蛋白成分，在該體液樣品穩定化用水溶液中，溶質包括人血清、動物血清白蛋白、無機堿金屬鹽、Tris堿、蛋白變性劑以及非離子型表面活性劑，該水溶液的pH值為6.7～7.6。在使用ELISA法從體液樣品(例如，外周血液)中檢測神經細胞損傷標志物蛋白成分NF?H時，本發明的體液樣品穩定化用水溶液能夠有效降低體液樣品中其它成分的干擾，提高檢測結果的準確性和可重復性，并且可以將體液中pg級別的NF?H穩定而準確地檢測出來，從而可以對腦中風患者的患病程度、治療效果、預后等進行診斷。

技術領域

本發明涉及生物醫學檢測領域，具體地說，涉及一種針對腦卒中(腦中風)患者的體液樣品穩定化用水溶液、體外檢測試劑盒、以及檢測系統。

背景技術

腦卒中俗稱中風，由腦血管阻塞或破裂導致的腦損傷引起，危害十分嚴重。流行病學研究發現，當今我國中風的致殘率排名第一，病死率排名第二，僅次于癌癥。沒有哪種疾病能夠像中風一樣，瞬間令人口眼歪斜、四肢麻木、癱瘓在床，讓人失去生活尊嚴。目前，我國每年新增中風病例超過370萬，存活的腦卒中患者近2000萬人，且患者數量處于急速上升期。高血壓、糖尿病、心臟病都是腦中風的危險因素，中老年人是中風高危人群。因此，需要建立快速而準確的診斷腦卒中的方法。

當今腦中風的診斷方法以影像學為主，精確度低、費用高昂，給社會衛生事業帶來重大負擔。加之中風患者病情變化迅速、個體差異明顯，給診斷與治療帶來巨大困難。

除影像學診斷外，在診斷腦中風的方法中，還有一種利用ELISA檢測腦脊液中神經絲蛋白(neurofilament protein，NFP)含量的方法。神經絲蛋白(NFP)是中樞神經系統含量最高的蛋白之一，是構建神經絲-神經細胞相互通信聯絡的通道的主要成分。神經絲蛋白由三種特定的蛋白亞基(NF-L，NF-M，NF-H)組裝而成。急性缺血性腦卒中直接造成大量的神經細胞死亡，而死亡的神經細胞則分解并釋放出大量的結構蛋白，其中包括NF-H。因血腦屏障的原因，NF-H大都滯留在腦脊液。要檢測腦脊液中的NF-H，通常采用脊髓穿刺的方法。但是，該方法給患者再次造成嚴重身心痛苦，給社會和家庭帶來巨大醫療負擔。

作為檢測腦脊液中NF-H的一種方法，較為普遍的是酶聯免疫吸附檢測(ELISA)法，其基本原理是利用抗原、抗體的特異性反應，用已知抗原或抗體檢測未知抗原或抗體。由于ELISA試驗方法具有敏感、特異、經濟、簡便、安全等特點，目前在疾病的診斷和療效觀察以及預防醫學等方面應用尤為廣泛。

作為一種測定微量抗原、抗體的經典方法，ELISA法廣泛應用于臨床檢驗診斷，其技術成熟，用途廣泛，分析靈敏度高、分析特異性好，操作簡單?；静僮鬟^程為：第一步，將抗原(或抗體)包被于固相載體(如聚苯乙烯塑料酶標板)上，放4℃冰箱過夜。第二步，用緩沖液洗包被板三次，加待測標本后放37℃溫箱(或室溫)反應1～2.5小時。第三步，用緩沖液洗板三次，加酶標抗體后置37℃溫箱(或室溫)反應1～2.5小時。第四步，用緩沖液洗板三次，加底物液顯色，硫酸中止反應，上機判斷結果。

作為ELISA發展的最新技術，發光ELISA將發光基團耦聯到探測抗體，直接測量其所發光量來對抗原進行定量，既減少了酶/底物反應帶來的附加干擾，又在極大程度上提高了探測靈敏度。

無論是通過影像學診斷還是ELISA腦脊液檢測，目前，腦中風診斷的主要難點有：早期無癥狀或輕度癥狀，難以檢測；實時診斷難以區分出血性中風或缺血性中風；長期治療無法判斷受損細胞類型和/或治療效果，造成中風診斷水平普遍低下。因此，早期診斷、快速診斷、精確診斷，特別是無需脊髓穿刺獲取腦脊液就能完成這樣的診斷，對于降低腦中風的致殘率和致死率具有特別重要的作用。

發明內容