[發(fā)明專利]一種三角帆蚌微衛(wèi)星標記及其應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711004443.8
• 申請日: 2015-12-15
• 公開（公告）號: CN107574167B
• 公開（公告）日: 2020-09-22
• 發(fā)明（設計）人: 鄭榮泉;毛媛媛
• 申請（專利權）人: 浙江師范大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/6888
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 金祺

本發(fā)明公開了一種三角帆蚌微衛(wèi)星標記，該三角帆蚌微衛(wèi)星標記的核苷酸序列為SEQ ID NO：2所述，或該核苷酸序列的互補序列；所述SEQ ID NO：2對應微衛(wèi)星位點Hc2。三角帆蚌微衛(wèi)星標記的特異性引物對為微衛(wèi)星位點Hc2特異性引物。其用途為：可用于檢測三角帆蚌種群遺傳多樣性、分析三角帆蚌親緣關系、三角帆蚌輔助育種的工具。

本發(fā)明是申請日為2015-12-15，申請?zhí)枮?01510933465.7的《三角帆蚌微衛(wèi)星標記及其應用》的分案申請。

技術領域

本發(fā)明屬于分子生物學DNA標記技術領域，具體涉及一種三角帆蚌微衛(wèi)星分子標記及其應用。

背景技術

微衛(wèi)星DNA，又稱為短串聯(lián)重復序列或簡單序列重復。它是以1-6個堿基的短核苷酸為基本單位首尾相連組成串聯(lián)重復序列，由于重復次數(shù)不同以及重復程度的不完全造成了每個位點的長度多態(tài)性。由于每個微衛(wèi)星兩端的序列多是相對保守的單拷貝序列，再經(jīng)電泳分析，即可顯示不同基因型個體微衛(wèi)星的多態(tài)性。微衛(wèi)星由于分布廣泛，密度大，多態(tài)性豐富，遵循孟德爾分離定律，共顯性遺傳、易于PCR擴增，所需DNA數(shù)量極少，對DNA質量要求不高，結果重復性好等優(yōu)點，目前已被廣泛應用于遺傳多樣性、親緣關系分析、連鎖圖譜構建、功能基因定位、分子標記輔助育種等領域。

三角帆蚌隸屬于體動物門(Mollusca)，雙殼綱(Bivalvia)，蚌目(Unionida)，蚌科(Unionidae)，帆蚌屬(Hyriopsis)，別名三角蚌、水殼等。三角帆蚌為我國特有種，分布于河北、山東、安徽、江蘇、浙江、江西、湖北和湖南等省大、中、小型湖泊及其周圍河流內(nèi)。三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)是我國最主要的淡水經(jīng)濟貝類之一，也是我國主要的淡水育珠蚌，其每年的淡水珍珠產(chǎn)量占世界的95％以上。但由于過度開發(fā)、環(huán)境污染等原因，三角帆蚌資源顯著減少，因此，保護天然種質資源是開展三角帆蚌育種的基礎。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術問題是提供一種三角帆蚌微衛(wèi)星標記及其擴增引物，為三角帆蚌的種群遺傳學、家系鑒定及分子標記輔助育種提供有效的工具。

為了解決上述技術問題，本發(fā)明提供一種三角帆蚌微衛(wèi)星標記，該三角帆蚌微衛(wèi)星標記的核苷酸序列為SEQ ID NO：1、或SEQ ID NO：2所述；或為上述核苷酸序列的互補序列；

所述SEQ ID NO：1對應微衛(wèi)星位點Hc1，所述SEQ ID NO：2對應微衛(wèi)星位點Hc2。

作為本發(fā)明的三角帆蚌微衛(wèi)星標記的改進：三角帆蚌微衛(wèi)星標記的特異性引物對為如下任一所示：

微衛(wèi)星位點Hc1特異性引物：F：CTGCATAAGGGCACATGATTTA

R：TGTTTGCAGCTAAAATGAGG

微衛(wèi)星位點Hc2特異性引物：F：GGTTTGCCTTCTACGAAAGATG

R：CCCCAAATGTTTTTATGACCAG。

本發(fā)明還同時提供了上述三角帆蚌微衛(wèi)星標記的用途：可用于檢測三角帆蚌種群遺傳多樣性、分析三角帆蚌親緣關系、三角帆蚌輔助育種的工具(即，對三角帆蚌進行遺傳分析、種質資源調查或輔助育種)。

作為本發(fā)明的三角帆蚌微衛(wèi)星標記的用途的改進：利用引物對檢測三角帆蚌種群遺傳多樣性的方法包括如下步驟：

1)、提取三角帆蚌外套膜基因組DNA(可采用酚-氯仿法)；

2)、微衛(wèi)星PCR擴增：

采用微衛(wèi)星位點Hc1特異性引物或者微衛(wèi)星位點Hc2特異性引物，以三角帆蚌基因組DNA為模板進行PCR，從而獲得三角帆蚌個體微衛(wèi)星擴增產(chǎn)物；