[發(fā)明專(zhuān)利]一種可用于膠原分型的生物材料制備方法在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201711004232.4 | 申請(qǐng)日： | 2017-10-24 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN109694407A | 公開(kāi)（公告）日： | 2019-04-30 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 關(guān)茜茹 | 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人： | 關(guān)茜茹 |
| 主分類(lèi)號(hào)： | C07K14/78 | 分類(lèi)號(hào)： | C07K14/78;C07K1/16;C07K1/14 |
| 代理公司： | 暫無(wú)信息 | 代理人： | 暫無(wú)信息 |
| 地址： | 710000 陜西省西安市雁*** | 國(guó)省代碼： | 陜西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 生物材料 分型 膠原 可用 制備 生物技術(shù)領(lǐng)域 膠原蛋白酶 制品純度 酶解 分解 | ||
1.一種可用于膠原分型的生物材料制備方法，制備的肽段可用于膠原分型、電泳和架橋分析，也可用于生物材料的制備，其特征在于制備過(guò)程包括下列各步驟：
(1)取市售或自制膠原溶于1～50ml的50～80％(v/v)乙酸溶液中，通氨氣5～20min除氧；
(2)加入CNBr固體10～80mg或濃度為90～99％(w/v)CNBr的乙酸溶液(所用乙酸濃度與上步驟一致)，再次通氨氣1～5min；
(3)密封容器中攪拌反應(yīng)2～40小時(shí)，控制反應(yīng)溫度為4～35。℃，反應(yīng)完成后，加入2～15倍的去離子水稀釋并凍干；
(4)凍干樣品再加2～15倍的去離子水稀釋并凍干，可如此反復(fù)多次，直至過(guò)量反應(yīng)物和副產(chǎn)物脫除干凈；
(5)樣品分離：使用市售翔丙基甲基纖維素或纖維素乙醇層析填料，起始緩沖液為0.01～0.05mol/L檸檬酸鈉(PH2.0～4.5)緩沖液，洗脫緩沖液為0.10～0.33mol/L檸檬酸鈉(PH2.0～4.5)緩沖液，柱清洗緩沖液為0.01～0.5mol/L NaOH緩沖液；
(6)填柱溫度為35～50℃，填柱緩沖液為柱清洗緩沖液，柱平衡用起始緩沖液進(jìn)行，直至PH值達(dá)到2.0～4.5；
(7)將冷凍干燥樣品10～100mg溶解于2～200ml起始緩沖液中，30～50℃條件下加熱處理8～20min后上柱，起始緩沖液與洗脫緩沖液梯度洗脫；
(8)以226nm測(cè)定吸光度，分別收集峰I、峰II、峰III，凍干即為三個(gè)肽段。
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