[發明專利]一種用于細胞培養水溶性三肽膠原的制備方法

在審

• 申請號: 201711003501.5
• 申請日: 2017-10-24
• 公開（公告）號: CN109694406A
• 公開（公告）日: 2019-04-30
• 發明（設計）人: 關茜茹
• 申請（專利權）人: 關茜茹
• 主分類號: C07K14/78
• 分類號: C07K14/78;C07K5/08
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明描述了一種用于細胞培養的水溶性三肽膠原制備方法。屬于醫用生物材料領域。主要解決目前水溶性三肽膠原存放過程中易交聯變性，從而無法水溶的問題。我們制備的水溶性膠原是利用水溶性三肽膠原及相應的抗氧劑相結合，制成的一種穩定的、一種用于細胞培養水溶性三肽膠原的制備方法，有助于水溶性三肽膠原的保存和應用。

技術領域

本發明涉及一種用于細胞培養的水溶性三肽膠原制備方法，其主要成份是水溶性三肽膠原和抗氧化劑組成，外觀為凍干海綿。

背景技術

三肽膠原是一種多細胞動物產生的細胞外基質成份之一。隨著組織工程的發展，被廣泛地用于組織培養、醫用材料等領域，常見的I型三肽膠原為非水溶性膠原，目前市場上常見的水溶性膠原其實是I型膠原降解為多肽后形成的膠原肽，人們在胎牛和犢牛皮中也提取出完全不同于I型膠原的未變性的水溶性膠原，但是由于其特殊的空間結構所產生的分子間力的作用極易產生交聯而轉化為不溶于水的三肽膠原，保存期極短，以至于無法大量地應用于實驗和生產過程中。本方法利用抗氧劑的獨特作用，減小水溶性膠原分子結構中分子間力的作用，從而達到克服其產生交聯的性質，延長保存期，改善保存效果，增加水溶性膠原的穩定性。

發明內容

本材料選用了市售的水溶性膠原與抗氧化劑復合而成：

1、水溶性膠原溶液的制備：取一定量市售的、未變性且存放期不超過一周的水溶性膠原，溶于去離子水中，攪拌溶解成均勻的質量體積比濃度為0.1％～ 0.5％的膠原膠液。

2、抗氧化劑水溶液的制備：市售L-抗壞血酸、花色素、茶單寧、葉黃素溶于去離子水，攪拌溶解成質量體積比濃度為5％～10％的抗氧化劑水溶液。

3、將(1)中所述溶液放入透析袋中，用(2)中的抗氧化劑水溶液做透析外液進行透析，透析溫度2～8℃，每4小時換一次透析外液，透析72小時，透析物5000rpm，2～8℃條件下離心10min，取上清液冷凍干燥成型。

具體實施方式

實施例1、

取市售水溶性膠原溶液100mg，加入1000ml去離子水中，攪拌溶解成質量體積比濃度為0.1％的膠原溶液。L-抗壞血酸50g溶于1000ml去離子水中，制成質量體積比濃度為5％的抗氧化劑溶液，該溶液現用現制，用抗氧化劑溶液做透析外液對膠原溶液進行透析，透析溫度2～8℃，每4小時換一次透析外液，透析72小時，透析物5000rpm，2～8℃條件下離心10min，取上清液冷凍干燥成型。

實施例2、

取市售水溶性膠原溶液500mg，加入1000ml去離子水中，攪拌溶解成質量體積比濃度為0.5％的膠原溶液。花色素100g溶于1000ml去離子水中，制成質量體積比濃度為10％的抗氧化劑溶液，該溶液現用現制，用抗氧化劑溶液做透析外液對膠原溶液進行透析，透析溫度2～8℃，每4小時換一次透析外液，透析72小時，透析物5000rpm，2～8℃條件下離心10min，取上清液冷凍干燥成型。

實施例3、

取市售水溶性膠原溶液200mg，加入1000ml去離子水中，攪拌溶解成質量體積比濃度為0.2％的膠原溶液。茶單寧70g溶于1000ml去離子水中，制成質量體積比濃度為7％的抗氧化劑溶液，該溶液現用現制，用抗氧化劑溶液做透析外液對膠原溶液進行透析，透析溫度2～8℃，每4小時換一次透析外液，透析72小時，透析物5000rpm，2～8℃條件下離心10min，取上清液冷凍干燥成型。

實施例4、