[發明專利]一種DNA提取方法

有效

• 申請號: 201711001972.2
• 申請日: 2017-10-24
• 公開（公告）號: CN109694862B
• 公開（公告）日: 2022-05-17
• 發明（設計）人: 吳燁嫻;安光明;陳兢
• 申請（專利權）人: 蘇州含光微納科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京君尚知識產權代理有限公司 11200
• 代理人: 邱曉鋒

本發明涉及一種DNA提取方法。該方法包括：在第一進液口內加入血液、紅細胞裂解液，第二進液口內加入高濃度鹽離子溶液，第三進液口內加入DNA洗脫液；將第一進液口內的血液和紅細胞裂解液混勻；離心機采用轉速1轉動，使第一進液口、第二進液口內的溶液進入過濾區并混合；離心機采用轉速2轉動，使過濾區內的DNA粘附在DNA吸附材料上，其余雜質進入第一儲液區，同時第三進液口中的洗脫液進入臨時儲液區；離心盤采用轉速3轉動，使臨時儲液區中的DNA洗脫液進入過濾區，并且使第一儲液區內的雜質進入第二儲液區；離心機采用轉速4轉動，使洗脫下的DNA進入第一儲液區；從第一儲液區中取出DNA。本發明能夠高效地實現DNA提取。

技術領域

本發明屬于生物技術、DNA提取技術領域，具體涉及一種DNA提取方法，能夠方便高效地實現DNA提取。

背景技術

現有的DNA提取方法主要有以下幾種：

1)經典的酚-氯仿法。一般是指細胞裂解后加入等體積的酚氯仿混合液，根據DNA易溶于水，不易溶于有機溶劑的特性，在有機溶劑環境下，蛋白質經過變性沉淀和離心后，有機溶劑存在于試管底層，DNA存在于上層水中，蛋白質沉淀存在于兩種液體之間，最后用乙醇將DNA從水中分離，沉淀，離心之后回收。酚-氯仿提取過程中需要多次復雜的離心操作，耗時長，容易造成樣品的交叉污染，使得DNA產量偏少，不適合大批量提取。

2)磁珠法。由于磁珠在特定的條件下可特異性地與核酸結合而不與樣本中的蛋白、糖類和酯類等雜質結合因而被廣泛地應用于核酸提取、病原體檢測等方面。磁珠加入到經過裂解后的混合液中，偏酸性(PH 5.0)的緩沖液中，從細胞中游離出來的DNA分子很快被吸附到帶有正電荷的磁珠上。吸附有DNA的磁珠在磁場作用下可定向團聚在試管的側面。此時，吸取并丟棄管中液體，加入洗滌液緩沖液，試管移開磁場，反復沖洗幾次后再放入磁場，磁珠又可以團聚在管壁。加入偏堿性(PH 8.0)的緩沖液和洗脫液可以講DNA從磁珠上洗脫下來，從而得到純化的基因組DNA溶液。磁珠法提取DNA操作步驟繁瑣且提取純度比硅膠膜吸附法低，全自動的核酸提取儀價格昂貴超出了偏遠地區醫院以及鄉鎮衛生院的承受范圍。

3)硅膠膜吸附法：該方法采用核酸吸附硅膠膜，其是一種特殊硅基質吸附材料，能夠特異性吸附DNA，而RNA與蛋白質穿過。在正常情況下，DNA表面覆蓋了一層由水分子組成的親水薄膜，以維持其水溶性。高濃度鹽離子的加入破壞了DNA表面親水薄膜的相對有序排列，形成了疏水環境。在此環境中，DNA與硅膠膜能有效結合，而蛋白質、代謝產物和其他污染物則不能結合。在高離子強度緩沖溶液中，硅膠膜上的硅表面的負電荷逐漸減少，從而使DNA分子脫水后暴露的磷酸基團帶有的負電荷與硅表面產生的排斥力減少，形成了大量的水合離子，DNA分子的水合程度降低而被驅使聚合到硅的表面上。同時細胞裂解液也會干擾雙鏈DNA分子之間的氫鍵形成而產生單鏈的DNA分子，單鏈DNA分子與硅表面形成氫鍵，且這種氫鍵的作用遠大于DNA分子與硅表面的靜電排斥力。如果高離子強度緩沖溶液的PH值低于硅表面的PKa值，這種靜電排斥力會變小，這就大大提高了硅表面對DNA分子的吸附能力，但當緩沖溶液的PH值高于硅表面的PKa值時，硅表面吸附的DNA分子就會被緩沖液洗脫下來。

發明內容

本發明針對上述問題，提供一種DNA提取方法，能夠將硅膠膜吸附法的反應流程集成到該離心盤上，高效地實現DNA提取。

本發明采用的技術方案如下：

一種DNA提取方法，適用于一DNA提取裝置，所述DNA提取裝置包括離心機和DNA提取離心盤，所述DNA提取離心盤安裝在所述離心機上，所述DNA提取離心盤包括至少一個DNA提取單元；所述DNA提取單元的正面設有第一進液口、第二進液口、第三進液口、臨時儲液區和過濾區，背面設有第一儲液區和第二儲液區；過濾區內設有DNA吸附材料；第一進液口、第二進液口分別通過流道與過濾區連通；第三進液口通過流道與臨時儲液區連通，臨時儲液區通過流道與過濾區連通；第二儲液區通過流道與第一儲液區連通，第一儲液區通過流道與過濾區連通；所述DNA提取方法包括以下步驟：