[發明專利]miR-429在制備乳腺癌診斷和檢測試劑盒中的應用

有效

• 申請號: 201710997165.4
• 申請日: 2017-10-24
• 公開（公告）號: CN107858427B
• 公開（公告）日: 2021-03-02
• 發明（設計）人: 戴文珠;劉寧;畢明瑜;唐文如;羅瑛;盛苗苗
• 申請（專利權）人: 昆明理工大學
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種miR?429的新用途，即在制備乳腺癌診斷和檢測試劑盒中的應用，所述miR?429核苷酸序列為UAAUACUGUCUGGUAAAACCGU；本發明提供了檢測miR?429含量的引物（包括反轉錄的頸環引物和real?time PCR的一對前后向引物），可得到穩定可靠的檢測結果；本發明提供的檢測引物對miR?429表達水平的檢測敏感度高、檢測準確，可大大提高對乳腺癌的檢測準確性；本發明可為個性化治療方案提供理論基礎和實際應用方法，且能夠為乳腺癌藥物的開發提供新的藥物靶點。

技術領域

本發明屬于生物醫學技術領域，具體涉及miR-429在制備乳腺癌診斷和檢測試劑盒中的應用。

背景技術

乳腺癌是全世界女性中排名第一位的惡性腫瘤。近年來，全世界大約有22.9％的女性被診斷出乳腺癌，而中國發病率就占總新發病例的12.2％，其中因患乳腺癌死亡人數占全世界乳腺癌死亡人數的9.6%。盡管現今的藥物靶向性和治療手段都有突破性的提高，但乳腺癌患者的復發、侵襲轉移現象依舊常見，致使晚期乳腺癌患者為死亡人數的主要占比。所以早發現、早治療可以減緩患者癌癥的發展進程，從而降低癌癥引發的死亡發生率。

現今，人們越來越重視探索與癌癥復發、轉移與之相關的潛在分子標記物用于早期診斷，而microRNA則是一種重要的分子標記物。

microRNA是一類長度約22nt的內源性RNA，其能夠識別特定的目標信使RNA(messenger RNA，mRNA)，并在轉錄后水平通過促進靶mRNA的降解和（或）抑制翻譯過程，發揮調控基因表達的作用，進而參與調節腫瘤細胞的發育、增殖、分化與凋亡的過程，在腫瘤發生、發展等過程中起重要調控作用。

microRNA性質穩定、含量豐富、易于定量檢測，且與疾病的發生發展存在顯著的相關性。相對于目前早期診斷方法，microRNA檢測可達到無傷口、準確，作為預后的分子標記可具有指導臨床個體化治療的優點。

發明內容

本發明的目的是提供一種miRNA的新用途， miRNA（miR-429）在作為乳腺癌的標志物中的應用，即miR-429在制備乳腺癌診斷和檢測試劑盒中的應用，所述miR-429核苷酸序列為UAAUACUGUCUGGUAAAACCGU；本發明檢測快速方便、準確率高，可以實現乳腺癌早期診斷。

miR-429在臨床診斷乳腺癌中的應用，通過熒光定量檢測miR-429在不同組織中的表達情況，將miR-429作為乳腺癌早期診斷的分子標志物。

本發明所述檢測試劑盒包括常規RNA提取試劑、用于配置反轉錄反應體系的試劑包括多聚腺苷酸聚合酶、反轉錄酶、反轉錄緩沖液、無核酸酶純水和檢測所需的反轉錄引物；用于配置real-time PCR反應體系的試劑包括SYBR Green、正反向檢測引物和純水。

所述miR-429的反轉錄引物Primer-RT序列如下：

5’- GTCGTATCCAGTGCACGCTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACACGGTT-3；利用該引物反轉錄出的cDNA進行實時熒光定量PCR，可以非常靈敏的檢測樣本的miR-429表達水平。

所述miR-429的real-time PCR檢測引物為:

。

另外，在本領域技術范圍內，通過該引物進行的miR-429的檢測，可以應用于實驗檢測乳腺癌細胞株上，也可以用于臨床檢測乳腺癌組織或血清中。

本發明具有以下有益效果：

（1）本發明通過大數據臨床樣本篩選，篩選出miR-429作為檢測乳腺癌的標志物方面的應用，為乳腺癌的檢測提供了一種新的檢測標志物；miR-429的檢測簡單，常規的分子生物實驗室即可完成；需要儀器為實時熒光定量PCR儀，常規實驗室基本都能購買，大大提高了檢測的實用性；