[發明專利]一種快速提取果實果肉中細胞壁酸性轉化酶的方法

有效

• 申請號: 201710995300.1
• 申請日: 2017-10-23
• 公開（公告）號: CN107663519B
• 公開（公告）日: 2021-11-09
• 發明（設計）人: 王利芬;王波;袁惠燕
• 申請（專利權）人: 蘇州大學
• 主分類號: C12N9/26
• 分類號: C12N9/26
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司 32103
• 代理人: 陶海鋒

1.一種快速提取果實果肉中細胞壁酸性轉化酶的方法，其特征在于，在溫度為0～4℃的條件下，包括如下步驟：

（1）分別配制提取緩沖液Ⅰ,Ⅱ和洗脫緩沖液：

提取緩沖液Ⅰ為150 mM Tris-HCl pH 8.0 ，10 mM MgCl₂，2 mM EDTA，0.1 mM PMSF，0.2% （v/v） β-巰基乙醇，1 mM 苯甲脒，3% （w/v） PVPP 和10 mM 抗壞血酸；

提取緩沖液Ⅱ為150 mM Tris-HCl pH 8.0，10 mM MgCl₂，2 mM EDTA，0.1 mM PMSF，0.2% （v/v） β-巰基乙醇，1 mM 苯甲脒， 10 mM 抗壞血酸；

洗脫緩沖液為150 mM Tris-HCl pH 8.0 ，0.5 M NaCl，10 mM MgCl₂，2 mM EDTA，0.1mM PMSF，0.2% （v/v） β-巰基乙醇，1 mM 苯甲脒， 10 mM 抗壞血酸；

（2）將果實果肉樣品研磨后，加入提取緩沖液Ⅰ，經冷凍離心處理，去除上清液，獲得沉淀；

（3）用提取緩沖液Ⅱ反復洗滌沉淀，去除蛋白質；

（4）將洗脫緩沖液加入到步驟（3）獲得的沉淀中，在超聲波頻率為40KHZ，功率為100W的條件下，超聲提取2～3 h，再經離心處理后得到的上清液即為果實果肉中細胞壁轉化酶的粗酶提取液。