[發(fā)明專利]一種檢測(cè)氟蟲腈的試劑盒及其制備方法和應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710990416.6
• 申請(qǐng)日: 2017-10-23
• 公開（公告）號(hào): CN109696548A
• 公開（公告）日: 2019-04-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬立才;聶靖東;劉薇;邢維維;吳雨洋
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京維德維康生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/577
• 分類號(hào): G01N33/577;G01N33/535
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明公開了一種檢測(cè)氟蟲腈的試劑盒及其制備方法與應(yīng)用。本發(fā)明所提供的氟蟲腈檢測(cè)試劑盒包括氟蟲腈酶標(biāo)板、氟蟲腈標(biāo)準(zhǔn)品工作液、氟蟲腈抗體工作液、酶標(biāo)記物工作液、底物液、終止液，還包括式I所示的氟蟲腈半抗原與載體蛋白偶聯(lián)所得的抗原。本發(fā)明所提供的氟蟲腈檢測(cè)試劑盒，操作簡(jiǎn)單、快速，靈敏度高、特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確性強(qiáng)，對(duì)于畜禽產(chǎn)品中氟蟲腈殘留快速檢測(cè)具有重大價(jià)值。式I。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于藥物殘留快速檢測(cè)領(lǐng)域，涉及一種檢測(cè)氟蟲腈的試劑盒及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)

氟蟲腈是一種苯基吡唑類殺蟲劑、殺蟲譜廣，用于防治地面和地下害蟲、莖葉處理和土壤處理、種子處理等。其作用機(jī)制在于阻礙昆蟲γ-氨基丁酸控制的氯化物代謝，因此對(duì)蚜蟲、葉蟬、飛虱、鱗翅目幼蟲、蠅類和鞘翅目等重要害蟲有很高的殺蟲活性，是被眾多農(nóng)藥專家推薦為代替高毒有機(jī)磷農(nóng)藥的首選品種之一，近年來，氟蟲腈也廣泛用于衛(wèi)生殺蟲劑，主要用于防殺蟑螂、螞蟻等有害生物。

雖然氟蟲腈防治害蟲效果很好，但是其對(duì)環(huán)境極其不友好，會(huì)對(duì)農(nóng)作物周圍的蝴蝶、蜻蜓等造成影響，對(duì)魚、蝦、蜜蜂、家蠶高毒。并且現(xiàn)有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究表明，短期攝取大量氟蟲腈會(huì)對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)造成不良影響，長期攝取氟蟲腈可能會(huì)損害肝臟、甲狀腺和腎臟。因此我國規(guī)定2009年10月1日起禁用氟蟲腈，目前僅可用于家庭衛(wèi)生害蟲。歐盟法律也規(guī)定，氟蟲腈不得用于人類食品產(chǎn)業(yè)鏈的畜禽養(yǎng)殖過程。

然而，2017年7月20日，比利時(shí)通過RASFF系統(tǒng)通報(bào)雞蛋中檢出氟蟲腈。問題雞蛋已被銷往12個(gè)國家或地區(qū)。據(jù)報(bào)道，問題雞蛋產(chǎn)自荷蘭，氟蟲腈被不恰當(dāng)?shù)挠糜陴B(yǎng)雞場(chǎng)的清潔物品中，造成雞蛋被檢出殘留物。此次事件說明，農(nóng)藥污染貫穿產(chǎn)品養(yǎng)殖、生產(chǎn)、加工、銷售流通等各個(gè)環(huán)節(jié)，對(duì)于政府后續(xù)監(jiān)管提出了更嚴(yán)峻的考驗(yàn)。“十三五”規(guī)劃中也提到從農(nóng)田到餐桌全鏈條監(jiān)管，實(shí)現(xiàn)食用農(nóng)產(chǎn)品全過程追溯管理。

而影響政府監(jiān)管或管理效果最重要的因素是對(duì)氟蟲腈的檢測(cè)手段，目前氟蟲腈的檢測(cè)還主要是針對(duì)蔬菜、環(huán)境中的殺蟲劑氟蟲腈檢測(cè)，方法主要有高效液相法和液相色譜質(zhì)聯(lián)用法，這些方法特異性強(qiáng)、靈敏度高，但是操作繁瑣、儀器昂貴，不適用于大批量樣品的篩選檢測(cè)。免疫檢測(cè)法在抗原抗體的定性定量方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，其操作簡(jiǎn)便快速、成本低、分析樣本量大，但現(xiàn)有的免疫檢測(cè)的樣本未能覆蓋到養(yǎng)殖加工環(huán)節(jié)，而且靈敏度不能達(dá)到對(duì)于氟蟲腈監(jiān)測(cè)的要求。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種檢測(cè)氟蟲腈的試劑盒及其制備方法與應(yīng)用，具有靈敏度高、準(zhǔn)確性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡(jiǎn)便的優(yōu)點(diǎn)，特別適用于牛、羊、豬、雞等動(dòng)物的可食組織、內(nèi)臟、雞蛋、牛奶、動(dòng)物產(chǎn)品中氟蟲腈殘留快速檢測(cè)。

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種氟蟲腈半抗原化合物，其結(jié)構(gòu)式如式Ⅰ所示：

（式Ⅰ）。

氟蟲腈半抗原是氟蟲腈和巰基丙酸反應(yīng)得到的，該半抗原含有活性羧基，可以與載體蛋白偶聯(lián)形成包被原和免疫原。

上述式Ⅰ所示化合物與載體蛋白的偶聯(lián)物也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。其中，所述載體蛋白為牛血清白蛋白（BSA）、人血清白蛋白（HSA）、鼠血清蛋白（MSA）、甲狀腺蛋白（BCG）、兔血清蛋白（RSA）、血藍(lán)蛋白（KLH）或卵清白蛋白（OVA）。

所述氟蟲腈半抗原與載體蛋白的偶聯(lián)物是指氟蟲腈半抗原與載體蛋白通過活性酯法得到的產(chǎn)物。

上述式Ⅰ所示化合物和/或上述式Ⅰ所示化合物與載體蛋白的偶聯(lián)物在制備氟蟲腈單克隆抗體中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。

上述式Ⅰ所示化合物、上述式Ⅰ所示化合物與載體蛋白的偶聯(lián)物和/或上述氟蟲腈單克隆抗體在制備檢測(cè)氟蟲腈的酶聯(lián)免疫試劑盒中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種制備上述式Ⅰ所示化合物的方法和一種制備上述式Ⅰ所示化合物與載體蛋白的偶聯(lián)物的方法。