[發(fā)明專利]一種糞菌移植治療中標(biāo)準(zhǔn)糞菌凍干粉制備工藝

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710985378.5
• 申請(qǐng)日: 2017-10-20
• 公開（公告）號(hào): CN107574134A
• 公開（公告）日: 2018-01-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張昊;種法政;李彩鳳;張鈞壽
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京益恒壽生命科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12N1/04;C12Q1/06
• 代理公司: 北京思創(chuàng)大成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司11614
• 代理人: 尹慧晶

1.一種糞便移植治療中標(biāo)準(zhǔn)糞菌凍干粉制備工藝，其特征在于包括以下步驟：

(1)標(biāo)準(zhǔn)糞菌液制備；

(2)凍干保護(hù)劑配制；

(3)三步法冷凍，真空干燥；

其中,凍干保護(hù)劑的配制為在無菌生理鹽水中分別加入10-20％海藻糖，5-10％甘油和0.02-0.05％維生素C混勻，濾過除菌。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的糞便移植治療中標(biāo)準(zhǔn)糞菌凍干粉制備工藝，其特征在于所述步驟(1)的具體操作為：無菌采集供體糞便，勻質(zhì)處理后，經(jīng)紗布過濾后離心，棄掉上清液得到糞菌泥漿沉淀物。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的糞便移植治療中標(biāo)準(zhǔn)糞菌凍干粉制備工藝，其特征在于所述步驟(3)的具體操作為：將凍干保護(hù)劑加入糞菌泥漿中，渦旋混勻，取1mL菌液進(jìn)行糞菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)，剩余液體置于凍干機(jī)內(nèi)，設(shè)定凍干程序：由室溫快速降溫至4℃，4℃至-40℃每分鐘降低1℃，-40℃到-60℃每分鐘降低5℃，當(dāng)溫度下降到-60℃以下時(shí)，將凍結(jié)好的樣品迅速放入凍干機(jī)鐘罩內(nèi)，啟動(dòng)真空泵抽氣直到樣品干燥，凍干的樣品置于-80℃冰箱，保存三個(gè)月。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的糞便移植治療中標(biāo)準(zhǔn)糞菌凍干粉制備工藝，其特征在于所述糞菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)選取對(duì)環(huán)境條件比較敏感且為益生菌的雙歧桿菌作為檢測(cè)指標(biāo)。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的糞便移植治療中標(biāo)準(zhǔn)糞菌凍干粉制備工藝，其特征在于所述糞菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)包括以下步驟：BBL培養(yǎng)平板制備，涂板，培養(yǎng)計(jì)數(shù)。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的糞便移植治療中標(biāo)準(zhǔn)糞菌凍干粉制備工藝，其特征在于所述BBL培養(yǎng)平板制備的具體操作為：BBL培養(yǎng)基70g，加入1ml吐溫80，加熱溶于1000ml蒸餾水中，115℃滅菌20min；冷卻至50℃，傾倒至直徑為90mm的無菌培養(yǎng)皿中，每皿10mL-15mL，置于無菌條件下冷卻凝固。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的糞便移植治療中標(biāo)準(zhǔn)糞菌凍干粉制備工藝，其特征在于所述涂板的具體操作為：將取得的樣品分別加至9mL體積的無菌生理鹽水中，倍比稀釋混勻，取10⁷和10⁸兩個(gè)稀釋度涂板。

8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的糞便移植治療中標(biāo)準(zhǔn)糞菌凍干粉制備工藝，其特征在于所述培養(yǎng)計(jì)數(shù)的具體操作為：將培養(yǎng)板置于厭氧袋中，放于培養(yǎng)箱中35℃-37℃厭氧培養(yǎng)72h后，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。