[發(fā)明專利]一種細(xì)胞色素C的離子交換純化方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710984427.3
• 申請日: 2017-10-20
• 公開（公告）號(hào): CN109694408A
• 公開（公告）日: 2019-04-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 高川;趙奕;王煦怡;劉詠梅
• 申請（專利權(quán)）人: 中藍(lán)晨光化工研究設(shè)計(jì)院有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/80
• 分類號(hào): C07K14/80;C07K1/18;C07K1/14
• 代理公司: 成都天嘉專利事務(wù)所(普通合伙) 51211
• 代理人: 何濤

本發(fā)明涉及一種細(xì)胞色素C的離子交換純化方法，屬于離子交換技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明采用大孔弱酸陽離子交換樹脂直接從細(xì)胞色素C提取液中吸附細(xì)胞色素C，然后采用一定pH值得洗脫液將樹脂吸附的細(xì)胞色素C洗脫下來，再經(jīng)濃縮、干燥得到高純度細(xì)胞色素C。該技術(shù)具有工藝操作簡單，產(chǎn)品純度高，產(chǎn)品收率高及產(chǎn)品生產(chǎn)成本低等優(yōu)點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種細(xì)胞色素C的純化方法，更具體地說，本發(fā)明涉及一種細(xì)胞色素C的離子交換純化方法，屬于離子交換技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

細(xì)胞色素丙，簡稱細(xì)丙或細(xì)胞色素C。細(xì)脆色素C是一種以鐵卟啉為輔基的呼吸酶，其結(jié)構(gòu)中蛋白質(zhì)部分是由104個(gè)氨基酸殘基組成的單一肽鏈。豬、牛和羊的細(xì)胞色素C分子中氨基酸種類順序都相同，分子量為12200，含鐵量為0..456，是一種堿性蛋白。細(xì)胞色素C廣泛存在于動(dòng)物的需氧組織中，集中分布于動(dòng)物心肌細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的線粒體膜的外表面。它在生物氧化過程中，是一個(gè)非常重要的電子傳遞體，加速酶促作用的進(jìn)行。對(duì)因組織缺氧而引起的瘋癱、肺氣腫等病療效甚佳，尤其在病情惡化搶救時(shí)，靜脈注射本品均有較好的效果。起到調(diào)整細(xì)胞呼吸與物質(zhì)代謝的作用細(xì)胞色素C易溶于水，也溶于酸和飽和硫酸銨溶液，對(duì)熱、干燥、酸比較穩(wěn)定，細(xì)胞色素C與線粒體內(nèi)膜結(jié)合較松，較易提取。但是在生產(chǎn)中，往往因純化工藝不過關(guān)導(dǎo)致所制備的細(xì)胞色素C純度不高，達(dá)不到細(xì)胞色素C醫(yī)藥級(jí)的要求。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在解決現(xiàn)有技術(shù)中的問題，提供一種細(xì)胞色素C的離子交換純化方法，該方法具有工藝操作簡單，產(chǎn)品純度高，產(chǎn)品收率高及產(chǎn)品生產(chǎn)成本低的優(yōu)點(diǎn)。

為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，其具體的技術(shù)方案如下：

一種細(xì)胞色素C的離子交換純化方法，其特征在于：包括以下工藝步驟：

A、將大孔弱酸陽離子交換樹脂填裝于離子交換柱內(nèi)，用酒精洗至流出液于水中不產(chǎn)生白色渾濁；用去離子水洗凈層析柱中大孔弱酸陽離子交換樹脂內(nèi)的酒精；

B、采用1NHCl400ml、1NNaOH400ml交替對(duì)大孔弱酸陽離子交換樹脂進(jìn)行轉(zhuǎn)型處理；用去離子水將大孔弱酸陽離子交換樹脂洗至中性，備用；

C、以5-10ml/min的流速使細(xì)胞色素C提取液通過樹脂交換柱；待細(xì)胞色素C提取液全部通過去離子交換柱后，用去離子水洗去層析柱內(nèi)殘留的細(xì)胞色素C提取液；

D、用1NNaOH洗脫樹脂吸附的細(xì)胞色素C；收集流出液并濃縮即得精制細(xì)胞色素C產(chǎn)品。

本發(fā)明優(yōu)選的，所述大孔弱酸陽離子交換樹脂為100份，所述細(xì)胞色素C提取液為1000-1500份。

本發(fā)明優(yōu)選的，大孔弱酸陽離子交換樹脂層析柱經(jīng)1NHCl400ml、1NNaOH400ml交替進(jìn)行轉(zhuǎn)型處理后再生，然后可重復(fù)使用。

本發(fā)明帶來的有益技術(shù)效果：

本發(fā)明采用大孔弱酸陽離子交換樹脂直接從細(xì)胞色素C提取液中吸附細(xì)胞色素C，然后采用一定pH值得洗脫液將樹脂吸附的細(xì)胞色素C洗脫下來，再經(jīng)濃縮、干燥得到高純度細(xì)胞色素C。該技術(shù)具有工藝操作簡單，產(chǎn)品純度高，產(chǎn)品收率高及產(chǎn)品生產(chǎn)成本低等優(yōu)點(diǎn)。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

一種細(xì)胞色素C的離子交換純化方法，包括以下工藝步驟：

A、將大孔弱酸陽離子交換樹脂填裝于離子交換柱內(nèi)，用酒精洗至流出液于水中不產(chǎn)生白色渾濁；用去離子水洗凈層析柱中大孔弱酸陽離子交換樹脂內(nèi)的酒精；

B、采用1NHCl400ml、1NNaOH400ml交替對(duì)大孔弱酸陽離子交換樹脂進(jìn)行轉(zhuǎn)型處理；用去離子水將大孔弱酸陽離子交換樹脂洗至中性，備用；