[發明專利]一種鼠傷寒沙門氏菌噬菌體ФSa-1凍干保護劑

有效

• 申請號: 201710983707.2
• 申請日: 2017-10-20
• 公開（公告）號: CN107574155B
• 公開（公告）日: 2019-12-17
• 發明（設計）人: 單寶龍;陳雷;王春鳳;谷巍;徐海燕;劉秀俠;姜延龍;王紅;李金敏;趙影;陳玉春;高緒娜;郭婷婷;辛國芹;董佩佩;汪祥燕;于佳民;趙倩;曾佳佳;亓秀曄
• 申請（專利權）人: 山東寶來利來生物工程股份有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12R1/93
• 代理公司: 37221 濟南圣達知識產權代理有限公司
• 代理人: 董潔

本發明公開了一種鼠傷寒沙門氏菌噬菌體ФSa?1凍干保護劑，該凍干保護劑的組成為：50~60 g/L脫脂奶粉，20~30 g/L魔芋粉，30~40 g/L蔗糖，20~30 g/L谷氨酸鈉，30~40g/L硫代硫酸鈉，20~30 g/L微晶纖維素，10~20 g/LTris。與現有技術中的凍干保護劑相比，本發明針對特定的鼠傷寒沙門氏菌噬菌體（Salmonella typhimurium phage）ΦSa?1篩選優化得到使得凍干粉中的噬菌體存活率較高的凍干保護劑，存活率高達75%，并且，凍干保護劑優化配方保護的噬菌體凍干粉對pH和熱有更強的耐受性能。

技術領域

本發明涉及一種鼠傷寒沙門氏菌噬菌體(Salmonella typhimurium phage)ΦSa-1凍干保護劑，屬于微生物發酵工業技術領域。

背景技術

鼠傷寒沙門氏菌具有廣泛的宿主，是危害人類和動物的重要腸道致病菌，每年的感染量約占沙門氏菌感染量的1/5，造成了嚴重的經濟損失。隨著經濟發展和人們對動物性食品安全問題廣泛關注，噬菌體作為一種天然綠色、安全有效的抗生素替代品，具有廣闊的應用前景。為此，申請人前期研究了一株具有鼠傷寒沙門氏菌防治效果的噬菌體ФSa-1，已于2017年4月28日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO：M 2017217，記載在專利CN 107099511A，該噬菌體ФSa-1以鼠傷寒沙門氏菌為宿主菌，對小鼠抗傷寒沙門氏菌感染有良好的防治效果，具有較好的耐熱性和pH耐受性，研發出的具有優異性能的噬菌體ФSa-1對防治鼠傷寒沙門氏菌具有十分重要的意義。該噬菌體ΦSa-1可以被制備成飼料添加劑、飲用水添加劑、飼料、飲用水、清潔劑或消毒劑各種形式的產品，能夠在較廣的溫度范圍和pH條件下對鼠傷寒沙門氏菌進行殺滅。

然而，如何將該噬菌體ФSa-1進行有效保存一直是困擾該申請人的主要問題。目前冷凍干燥是保持微生物、細胞及蛋白質等活性物質生物活性的一個普遍的方法。但是在冷凍干燥過程中，冷凍和干燥不可避免地會造成部分微生物細胞的損傷、死亡，及某些蛋白分子的鈍化。

一直以來我國生產的噬菌體制劑以液體形式保存，效價低，活力較差，噬菌體制劑幾乎全部依賴于進口，成本也隨之提高。凍干保護劑的應用使噬菌體懸液形成干粉方便運輸、銷售和使用，具有重大的實際應用價值。保護劑又稱穩定劑，是指冷凍干燥過程中除抗原物質以外的添加物，是為保護或降低在冷凍干燥和保存過程中微生物或蛋白質的生物活性與抗原活性的損失、變化程度，加稀釋液后迅速溶解，最大程度恢復原有性狀的一類物質。

現有技術中公開了多種噬菌體保護劑，但并非每種保護劑對所有微生物都有保護作用，由于微生物結構和大小的差異，不同的微生物即使采用相同保護劑所取得的效果也不同。

如CN 105950567 A公開了一種噬菌體的凍干粉膠囊保存方法，其中的噬菌體保存保護劑，包括以下組分：脫脂奶粉5-12份、聚乙二醇2-8份、藻蛋白粉0.2-0.6份、谷氨酸鈉0.3-0.8份、羧甲基纖維素0.3-0.5份、膨潤土0.08-0.15、氫氧化鋁膠0.03-0.18份、棉子糖0.3-1.2份、硫酸鎂0.1-0.6份、氯化鈣0.6-1.2份、硫酸鈉0.3-0.8份、甘露醇0.5-1.2份、磷酸氫二鉀0.03-0.2份、磷酸二氫鈉0.05-0.3份、甘油0.02-0.08份、二甲基亞砜0.01-0.04份和水100份。

CN 105950475 A公開了一種噬菌體的凍干保存方法，其中的噬菌體保存保護劑，包括以下組分：脫脂乳6-18份、硅藻土0.3-0.8份、糖醇2-5份、DEAE-葡聚糖0.8-1.5份、阿拉伯膠0.01-0.16份、牛血清白蛋白0.7-1.2份、麥芽糖糊精0.05-0.3份、蜂蜜0.01-0.08份、棉子糖0.8-1.6份、磷酸鋁0.03-0.06份、氯化鈉0.01-0.04份、硫酸鎂0.3-0.7份、氯化鈣0.6-1.2份、甘油1-3份、阿拉西A0.05-0.12份和水100份。