[發(fā)明專利]一種間充質(zhì)干細(xì)胞增殖分化培養(yǎng)液

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710981339.8
• 申請日: 2017-10-20
• 公開（公告）號: CN107574147B
• 公開（公告）日: 2018-11-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王莉;胡芳;關(guān)凱
• 申請（專利權(quán)）人: 湖南源品細(xì)胞生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;C12N5/077
• 代理公司: 深圳市蘭鋒知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44419
• 代理人: 曹明蘭

本發(fā)明公開了一種間充質(zhì)干細(xì)胞增殖分化培養(yǎng)液，該培養(yǎng)液以DMEM/F12培養(yǎng)基溶液為基礎(chǔ)培養(yǎng)液，該基礎(chǔ)培養(yǎng)液中含有有效濃度的白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ；所述間充質(zhì)干細(xì)胞為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，所述分化指成骨分化，所述白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ的濃度為5?60μM。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ可以促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖和成骨分化，可以用于制備成誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的培養(yǎng)液，以有效提高骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化成骨骨量。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于干細(xì)胞領(lǐng)域，涉及干細(xì)胞增殖分化，具體涉及一種以白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ為營養(yǎng)因子的間充質(zhì)干細(xì)胞增殖分化培養(yǎng)液。

背景技術(shù)

骨組織工程的研究為治療大段骨缺損提供了一個新的希望。骨組織工程由干細(xì)胞、營養(yǎng)因子和支架材料3要素組成。良好的干細(xì)胞和營養(yǎng)因子對骨缺損的治療至關(guān)重要，因此，尋找增殖和分化能力強(qiáng)的干細(xì)胞，具備較強(qiáng)地誘導(dǎo)并促進(jìn)增殖和分化的營養(yǎng)因子，達(dá)到最佳的骨缺損修復(fù)效果是骨科領(lǐng)域不斷深入研究的熱點。

營養(yǎng)因子可以促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞成骨，是骨組織工程中必不可少的一個組成部分。由于單純間充質(zhì)干細(xì)胞分化成骨，骨量較少，故營養(yǎng)因子的作用就顯得較為重要。

白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ為白術(shù)中的一種化合物，與白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ和白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ為白術(shù)中的主要內(nèi)酯成分。其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下，生源上白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ為白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ的氧化產(chǎn)物，白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ為白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的脫水產(chǎn)物。通常認(rèn)為，白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ和白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ為白術(shù)的主要活性成分，是其抗炎和抗癌有效成分(參考文獻(xiàn)：白術(shù)內(nèi)酯類成分及其藥理作用研究進(jìn)展，中國藥房2012年第23卷第39期)。

申請人發(fā)現(xiàn)白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ有諸多特別的、不同于白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ和白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的活性，比如白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ可以促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化。目前，尚未有研究公開白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ的這些活性。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種以白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ為營養(yǎng)因子的間充質(zhì)干細(xì)胞增殖分化培養(yǎng)液。

實現(xiàn)本發(fā)明上述目的技術(shù)方案如下：

一種以白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ為營養(yǎng)因子的間充質(zhì)干細(xì)胞增殖分化培養(yǎng)液，以DMEM/F12培養(yǎng)基溶液為基礎(chǔ)培養(yǎng)液，該基礎(chǔ)培養(yǎng)液中含有有效濃度的白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ。

優(yōu)選地，所述間充質(zhì)干細(xì)胞為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。

優(yōu)選地，所述分化指成骨分化。

優(yōu)選地，所述白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ的濃度為5-60μM。

白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ在制備誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的試劑中的應(yīng)用。

優(yōu)選地，所述間充質(zhì)干細(xì)胞為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。

本發(fā)明的突出優(yōu)點：

本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ可以促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖和成骨分化，可以用于制備成誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的培養(yǎng)液，以有效提高骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化成骨骨量。

附圖說明

圖1為CCK8法檢測白術(shù)內(nèi)酯對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖的影響；

圖2為鈣化結(jié)節(jié)染色結(jié)果。

具體實施方式

下面就結(jié)合實施例具體介紹本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，由于篇幅原因，實驗過程的描述無法做到非常詳細(xì)，凡是實驗中未詳細(xì)描述的部分均為本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的常規(guī)操作。

一、實驗材料

白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ和白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ自制，純度大于98％。

DMEM/F12(1:1)培養(yǎng)基作為無血清培養(yǎng)液，購于Hyclone公司。

二、實驗方法

1、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)的分離和培養(yǎng)