[發明專利]基于三維微組織水平的抗腫瘤藥物篩選試劑盒及其使用方法

在審

• 申請號: 201710980709.6
• 申請日: 2017-10-19
• 公開（公告）號: CN107557426A
• 公開（公告）日: 2018-01-09
• 發明（設計）人: 宋焱艷
• 申請（專利權）人: 宋焱艷
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02;C12N5/09
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司33212
• 代理人: 朱瑩瑩

1.基于三維微組織水平的抗腫瘤藥物篩選試劑盒，其特征在于，包括三維細胞培養材料；組織細胞分散試劑；蛋白酶抑制劑；基礎細胞培養基；血清；抗生素；平衡鹽溶液；細胞活力檢測試劑；細胞過濾網。

2.根據權利要求1所述試劑盒，其特征在于，所述三維細胞培養材料包括懸浮培養板，懸滴培養板，微流體三維培養板及配套裝置，水凝膠，三維培養用磁珠及配套裝置，固體三維支架材料，細胞培養板中的一種或多種。

3.根據權利要求2所述試劑盒，其特征在于，所述三維細胞培養材料為3D微孔懸浮培養板，或以多糖和/或多肽為主要成分的水凝膠和細胞培養板配合使用。

4.根據權利要求1所述試劑盒，其特征在于，

所述組織細胞分散試劑為胰蛋白酶，EDTA-胰蛋白酶，膠原酶，中性蛋白酶，鏈霉蛋白酶，木瓜蛋白酶，DNA酶，透明質酸酶，胰液素，TrypLE，Trypzean，Liberase，Blendzyme，Accutase中的一種或多種；所述蛋白酶抑制劑為胰酶中和液，抑肽酶，抗蛋白酶肽，胰酶抑制劑，蛋白酶抑制劑的一種或多種；

所述基礎細胞培養基包括：BME細胞培養基，IMDM細胞培養基，RMPI 1640細胞培養基，MEM細胞培養基，DMEM細胞培養基，F10細胞培養基，F12細胞培養基，DMEM/F12細胞培養基，McCoy's 5A細胞培養基，199細胞培養基，Fisher’s細胞培養基，CMRL細胞培養基，GMEM細胞培養基，Leibovitz's L-15細胞培養基，MCDB 131細胞培養基，Ames'細胞培養基中的一種或多種；

所述血清包括：牛血清，馬血清，馬血清，兔血清，雞血清，豬血清，其他動物血清，合成血清替代品，血清替代物中的一種或多種；所述抗生素包括：青霉素，鏈霉素，慶大霉素，放線菌素，新霉素，卡那霉素，多粘菌素，制霉菌素，兩性霉素中的一種或多種；所述平衡鹽溶液包括PBS，D-PBS，Hank’s，D-Hank’s，EBBS中的一種或多種；所述細胞過濾網包括：無菌紗布，塑料細胞過濾網，金屬細胞過濾網和/或其他材質的網狀纖維中的一種或多種；

所述細胞活力檢測試劑包括：alamarBlue，臺盼藍，MTT試劑，XTT試劑，WST-1試劑，CCK-8試劑，live/dead細胞活力檢測試劑中的一種或多種。

5.權利要求1-4任一所述試劑盒的使用方法，其特征在于，首先，將病人腫瘤組織進行分散，得到的組織塊、組織碎片、細胞團、和/或分散的單個細胞；然后，將分散后的病人腫瘤組織、細胞樣本通過三維培養的方法進行培養，使細胞在三維空間中生長，形成具有球形的和/或不規則的立體形狀的三維結構；最后，用三維培養得到的腫瘤微組織進行藥敏測試。

6.根據權利要求5所述的使用方法，其特征在于，具體包括如下步驟：

1)將來自病人的新鮮組織樣本浸泡于抗生素溶液中進行消毒，并用平衡鹽溶液清洗；

2)用組織細胞分散試劑消化細胞間質；

3)用細胞過濾網過濾，得到直徑為10～500μm的細胞團或獨立分散的細胞；

4)將細胞接種在三維培養材料表面和/或內部，添加細胞培養基，進行三維細胞培養；

5)用待測的抗腫瘤藥物溶液處理細胞；

6)用細胞活力檢測試劑處理細胞；

7)用酶標儀、細胞計數器、激光共聚焦顯微鏡和/或流式細胞儀對處理過的細胞進行數據的采集；

8)利用采集到的信號和/或數據分析細胞活力，得到抗腫瘤藥物對腫瘤細胞的抑制效果結論。

7.根據權利要求6所述的使用方法，其特征在于，血清的濃度為0％～99.9％之間的任意范圍；抗生素的濃度為0.00001mg/mL～10000mg/mL之間的任意范圍。

8.根據權利要求7所述的使用方法，其特征在于，血清的濃度為5％～20％之間的任意濃度；抗生素的濃度為0.001mg/mL～100mg/mL。

9.根據權利要求6所述的使用方法，其特征在于，所述步驟4)中三維細胞培養中，所述三維培養材料為3D微孔懸浮培養板，使細胞終濃度為3000～8000個/微孔；或三維培養水凝凝膠，使細胞終濃度為5萬～25萬個/mL。

10.根據權利要求6所述的使用方法，其特征在于，所述步驟4)三維細胞培養的持續時間大約為1～7天。