[發明專利]植物作為宿主在表達凝血七因子中的應用有效
| 申請號： | 201710979579.4 | 申請日： | 2017-10-19 |
| 公開（公告）號： | CN109679986B | 公開（公告）日： | 2022-08-02 |
| 發明（設計）人： | 王躍駒;馬潔 | 申請（專利權）人： | 北京睿誠海匯健康科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/82 | 分類號： | C12N15/82;C12N9/64 |
| 代理公司： | 北京集佳知識產權代理有限公司 11227 | 代理人： | 張柳;趙青朵 |
| 地址： | 102104 北京市*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 植物 作為 宿主 表達 凝血 因子 中的 應用 | ||
【權利要求書】：
1.一種植物作為宿主表達凝血七因子的方法，其特征在于，將表達載體轉化到農桿菌中，通過農桿菌介導真空滲透入植物組織后，提取、分離蛋白質，獲得人凝血七因子；
所述凝血七因子為人FVII；
所述農桿菌介導真空滲透包括如下步驟：
步驟1：抽真空25～45s；
步驟2：保持真空-95kPa壓力30～60s；
步驟3：釋放壓力使得滲透液滲入所述植物組織；
重復上述步驟2～3次，避光處理4d；
所述植物為生菜；
所述表達載體，包括凝血七因子的核苷酸序列和雙元植物載體；
所述凝血七因子為人FVII；
其構建方法包括如下步驟：
步驟1：在凝血七因子的核苷酸序列的5’末端加入Xbal限制性酶切位點，在3’末端加入Sacl限制性酶切位點；
步驟2：克隆到載體pUC57載體中，獲得克隆載體pUC57-FVII；
步驟3：通過Xbal/Sacl從步驟2所得的克隆載體中獲得基因片段FVII，克隆至雙元植物載體pCam35S，分別獲得表達載體p35S-FVII；
所述人FVII的密碼子優化后的FVII cDNA序列如SEQ ID No.3所示。
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