[發(fā)明專利]人EZH2突變基因及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710977555.5
• 申請(qǐng)日: 2017-10-19
• 公開（公告）號(hào): CN107523571B
• 公開（公告）日: 2018-10-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃志清;陳強(qiáng);吳凡;林欣;林偉峰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 福建醫(yī)科大學(xué);福建省創(chuàng)欣生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/12
• 分類號(hào): C12N15/12;C12Q1/6886
• 代理公司: 福州元?jiǎng)?chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學(xué)俊

胃癌是中國人最常罹患和最易致死的主要癌癥，其化療療效評(píng)估主要靠影像學(xué)手段和血清學(xué)指標(biāo)，然而時(shí)效性較差且特異性不強(qiáng)。本發(fā)明提供了人EZH2突變基因、突變基因檢測(cè)方法以及在胃癌化療療效評(píng)估中的應(yīng)用。所述EZH2突變基因的突變發(fā)生于19號(hào)內(nèi)含子的第1234?1240位點(diǎn)，優(yōu)選的突變基因序列如SEQ ID NO:1?4所示，尚未見報(bào)道；這可以為胃癌發(fā)生發(fā)展機(jī)理的解析和藥物開發(fā)等提供依據(jù)和基礎(chǔ)。此外EZH2突變基因及其檢測(cè)方法的應(yīng)用，將有助于胃癌化療療效評(píng)估和病情監(jiān)測(cè)以期指導(dǎo)治療方案的制定。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因檢測(cè)和應(yīng)用領(lǐng)域，具體涉及EZH2突變基因、EZH2突變基因檢測(cè)及其在胃癌化療療效評(píng)估中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

胃癌是中國人最常罹患和最易致死的主要癌癥，其發(fā)病率位居惡性腫瘤的第二位、死亡率位居第三位。目前臨床上對(duì)于胃癌化療療效評(píng)估主要依靠的是影像學(xué)手段和血清學(xué)指標(biāo)等。然而影像學(xué)手段往往存在一定的滯后，且有時(shí)無法準(zhǔn)確反映癌灶的分子實(shí)質(zhì)；而CEA、CA72-4、CA19-9等血清標(biāo)記物普遍特異性不強(qiáng)，其監(jiān)測(cè)對(duì)于胃癌的預(yù)后判斷和診療指導(dǎo)價(jià)值有限。

EZH2(Enhancer of Zeste Homolog 2)是近年揭示的一種人類基因，它是PcG(Polycomb Group)基因家族的核心成員。PcG家族包括PRC1和PRC2兩種多聚復(fù)合物，分別起著維持基因抑制和起始基因沉默的作用。PRC2復(fù)合物是由包括EZH2在內(nèi)的幾個(gè)基因共同構(gòu)成，EZH2是PRC2的催化活性成分，其高度保守的SET結(jié)構(gòu)域可對(duì)核小體組蛋白H3的第9、27位賴氨酸進(jìn)行甲基化修飾，從而抑制包括細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、腫瘤轉(zhuǎn)移等相關(guān)的數(shù)百種基因的表達(dá)。

EZH2基因在胚胎發(fā)育過程中通過對(duì)染色體的修飾而維持同源異型基因的沉默狀態(tài)。此外，該基因在人類很多類型惡性腫瘤過度表達(dá)，其在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著非常重要的作用。首先發(fā)現(xiàn)在血液系統(tǒng)惡性腫瘤中發(fā)現(xiàn)EZH2基因的高表達(dá)，隨后又在前列腺癌、乳腺癌、膀胱癌、肝癌和胃癌中都發(fā)現(xiàn)有該基因高表達(dá)，而其在對(duì)應(yīng)的正常組織中不表達(dá)或僅少量表達(dá)。EZH2蛋白已作為一種新的腫瘤標(biāo)記物用于監(jiān)測(cè)前列腺癌、乳腺癌等的惡性演變。

EZH2基因含20個(gè)外顯子和19個(gè)內(nèi)含子，外顯子長(zhǎng)度為41-323bp，開放讀碼框分布在19個(gè)外顯子上；內(nèi)含子長(zhǎng)度為0.15-17.7kb，已知的轉(zhuǎn)錄后有兩個(gè)剪接體：轉(zhuǎn)錄變異體1和轉(zhuǎn)錄變異體2；cDNA全長(zhǎng)2.7kb，編碼613個(gè)氨基酸。EZH2基因的C端因有1個(gè)Su(var)3-9、Enhancer ofzeste和trithorax三種蛋白共同結(jié)構(gòu)域而命名的高度保守的SET結(jié)構(gòu)域；EZH2蛋白所介導(dǎo)轉(zhuǎn)錄抑制需要依賴完整的SET區(qū)域，所以說該SET區(qū)域如果丟失了就不能產(chǎn)生抑制表型，并且在一些情況下可以使基因去抑制化。而EZH2的19號(hào)內(nèi)含子如果發(fā)生特定突變，引起可變剪切發(fā)生將導(dǎo)致SET區(qū)域缺失，從而腫瘤細(xì)胞中無法依靠EZH2修飾抑癌基因。

目前，EZH2基因?qū)τ谖赴┑呐R床指導(dǎo)和應(yīng)用還遠(yuǎn)未得到充分揭示和開展。申請(qǐng)人前期選擇胃癌患者的ctDNA（circulating tumor DNA，循環(huán)腫瘤DNA）樣本，對(duì)其進(jìn)行包括EZH2基因在內(nèi)的基因集的捕獲測(cè)序（即目標(biāo)基因捕獲聯(lián)合二代測(cè)序技術(shù)）研究；結(jié)合樣本的臨床病理信息分析，發(fā)現(xiàn)EZH2基因第19號(hào)內(nèi)含子的特定突變對(duì)胃癌的預(yù)后可實(shí)現(xiàn)良好的評(píng)估和預(yù)測(cè)，具有作為胃癌化療療效評(píng)估指標(biāo)的潛能，目前國內(nèi)外尚無此特定突變及其應(yīng)用的報(bào)道。對(duì)于預(yù)后預(yù)測(cè)，從ctDNA樣本入手便于建立無創(chuàng)的檢測(cè)方法是當(dāng)前臨檢的趨勢(shì)和熱門，然而由于ctDNA含量很低且碎片化嚴(yán)重，因此傳統(tǒng)的基于Sanger測(cè)序和實(shí)時(shí)熒光定量PCR的檢測(cè)方法均不適合。二代測(cè)序技術(shù)可以靈敏有效地對(duì)稀有突變進(jìn)行高通量檢測(cè)，并且可以發(fā)現(xiàn)未知突變，因此是一種理想的檢測(cè)方法。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)目前臨床上缺乏特異有效的胃癌化療療效評(píng)估指標(biāo)的不足，本發(fā)明提供了與此相關(guān)的EZH2基因的特定突變特征及其檢測(cè)方法，并將其應(yīng)用于胃癌的化療療效評(píng)估中。這些可以為胃癌化療療效評(píng)估、病情監(jiān)測(cè)和發(fā)生發(fā)展機(jī)理的解析等提供依據(jù)和基礎(chǔ)。