[發明專利]植物作為宿主在表達卡那抗體中的應用

在審

• 申請號: 201710977067.4
• 申請日: 2017-10-19
• 公開（公告）號: CN107723310A
• 公開（公告）日: 2018-02-23
• 發明（設計）人: 王躍駒;馬潔;焦順昌
• 申請（專利權）人: 北京睿誠海匯健康科技有限公司
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;C07K16/24
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司11227
• 代理人: 張柳,趙青朵

1.植物作為宿主在表達卡那抗體中的應用；所述植物選自生菜、白菜、玉米、大豆或小麥；所述植物的器官選自種子、葉、根莖或整株植物。

2.一種表達載體，其特征在于，包括卡那的重鏈序列或輕鏈序列以及載體。

3.根據權利要求2所述的表達載體，其特征在于，所述卡那的重鏈序列或輕鏈序列為將卡那重鏈、卡那輕鏈的密碼子優化為植物偏好的密碼子，獲得的優化的卡那的重鏈序列或優化的卡那的輕鏈序列。

4.根據權利要求3所述的表達載體，其特征在于，所述優化的卡那的重鏈序列如SEQ ID No.1所示；所述優化的卡那的重鏈的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；

所述優化的卡那的輕鏈序列如SEQ ID No.3所示；所述優化的卡那的輕鏈的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。

5.根據權利要求2至4任一項所述的表達載體，其特征在于，所述載體為雙元植物載體。

6.根據權利要求2至5任一項所述的表達載體，其特征在于，其構建方法包括如下步驟：

步驟1：分別將卡那重鏈、卡那輕鏈的密碼子優化為植物偏好的密碼子，獲得：

ⅰ.優化的卡那的重鏈序列；

ⅱ.優化的卡那的輕鏈序列；

步驟2：在所述優化的卡那的重鏈序列的5’末端加入Xbal限制性酶切位點，在3’末端加入Sac I位點；

在所述優化的卡那的輕鏈序列的5’末端加入Xbal限制性酶切位點，在3’末端加入Sac I位點；

克隆到pUC57載體中，分別獲得pCana-H克隆載體，pCana-L克隆載體；

步驟3：通過Xbal/Sacl分別從步驟2所得的克隆載體中獲得基因片段，克隆至雙元植物載體pCam35S，分別獲得表達載體p35S-Cana-H，p35S-Cana-L。

7.根據權利要求2至6任一項所述的表達載體在表達卡那抗體中的應用。

8.一種植物作為宿主表達卡那抗體的方法，其特征在于，將如權利要求2至6任一項所述的表達載體轉化到農桿菌中，通過農桿菌介導真空滲透入植物組織后，提取、分離蛋白質，獲得卡那抗體。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述農桿菌介導真空滲透包括如下步驟：

步驟1：抽真空25～45s；

步驟2：保持真空(-95kPa)壓力30～60s；

步驟3：釋放壓力使得滲透液滲入所述植物組織；

重復上述步驟2～3次，避光處理4d。