[發(fā)明專利]霍山石斛提取物在調(diào)控血糖方面的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710976225.4
• 申請(qǐng)日: 2017-10-19
• 公開（公告）號(hào): CN107468913B
• 公開（公告）日: 2021-01-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄧輝;韓邦興;陳乃富;陳乃東;朱富成;姚靜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 皖西學(xué)院
• 主分類號(hào): A61K36/8984
• 分類號(hào): A61K36/8984;A61K31/715;A61P3/10;A61P3/06;A61P3/04
• 代理公司: 合肥市浩智運(yùn)專利代理事務(wù)所(普通合伙) 34124
• 代理人: 王志興

1.霍山石斛提取物在制備調(diào)控血糖藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用是通過促進(jìn)P13K/AKT信號(hào)通路，增強(qiáng)對(duì)葡萄糖的轉(zhuǎn)運(yùn)和利用途徑起作用，該藥物用于緩解糖尿病病情；其中，所述霍山石斛提取物的獲取方法為：

(1)取霍山石斛切片，50℃烘干后研磨成粉末；80％乙醇脫去色素，50℃水提5h；95％乙醇，過夜醇沉；60％蒸干，得霍山石斛粗多糖；

(2)采取Sevage聯(lián)合木瓜蛋白酶法脫蛋白，接著進(jìn)行透析、真空冷凍干燥，得霍山石斛多糖；采取Sevage聯(lián)合木瓜蛋白酶法脫蛋白的具體方法為：在獲取的霍山石斛粗多糖中加入2％木瓜蛋白酶，50℃水浴2h，再按照霍山石斛粗多糖溶液：正丁醇：氯仿體積比例為25：1：5加入反應(yīng)試劑，反復(fù)操作4-5次，直到無蛋白層；

(3)選擇陰離子交換層析法對(duì)霍山石斛多糖進(jìn)行分離純化，收集目標(biāo)洗脫液，濃縮至100-200mg生藥/mL，濾過即得；具體工藝為：

A、DEAE-52離子柱層析

選擇陰離子交換層析法對(duì)霍山石斛多糖進(jìn)行分離純化，填充介質(zhì)為DEAE-52；DEAE-52柱層析的流程如下：

①準(zhǔn)備工作

霍山石斛多糖：稱量0.1g的多糖，溶于50mL蒸餾水中，配制濃度為20mg/mL多糖溶液；梯度洗脫液的配制：配制0.1mol/L、0.3mol/L、0.5mol/LNaCl和0.5mol/LNaOH；

②梯度洗脫

DEAE-52進(jìn)行預(yù)處理并填充至層析柱中，啟動(dòng)自動(dòng)收集器，按設(shè)置好的程序運(yùn)行1mL/min，5min/管，洗脫液按照NaCl溶液濃度從低到高依次進(jìn)行，最后換用0.5mol/LNaOH；

③苯酚-硫酸跟蹤檢測(cè)每個(gè)試管中多糖的含量，繪制洗脫曲線，收集到三個(gè)峰值下的洗脫液，將其分別命名為DPI、DPII、DPIII；

④將三個(gè)組分DPI、DPII和DPIII分別進(jìn)行細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)其是否具有降血糖的活性，其中，DPII的活性最佳，將其用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)；

B、SephadexG-100柱層析

對(duì)DEAE-52純化后的DPII組分做進(jìn)一步的分離純化，此時(shí)填充介質(zhì)為更改為SephadexG-100；參照DEAE-52柱層析操作步驟，配制0.05mol/LNaCl為洗脫液，洗脫速度1mL/min，4min/管，繪制洗脫曲線，將DPII組分經(jīng)SephadexG-100進(jìn)一步的洗脫后，只得到一個(gè)洗脫峰；收集該洗脫峰下洗脫液，濃縮至100-200mg生藥/mL，濾過，作為最終所需的霍山石斛提取物；

C、成分分析

對(duì)最終獲得的霍山石斛提取物進(jìn)行成分分析，根據(jù)GCMS-QP2010氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用得出的離子峰碎片及單糖組成可得出：DPII組分主要鏈接方式由1,3,4-Rha，1,4-p-Glc，1,3,4-Glc，還有阿拉伯糖和木糖組成的糖苷鍵，分子量為48365Da。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的霍山石斛提取物在制備調(diào)控血糖藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述霍山石斛提取物通過上調(diào)磷酸肌醇激酶來激活胰島素受體下游的PI3K的表達(dá)，產(chǎn)生NADP，刺激Ca2+依賴的蛋白激酶，促進(jìn)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白對(duì)葡萄糖的轉(zhuǎn)運(yùn)，降低血糖值。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的霍山石斛提取物在制備調(diào)控血糖藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述霍山石斛提取物通過上調(diào)CAMP，啟動(dòng)信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)，促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度上升，增加糖酵解和蛋白合成過程的進(jìn)行。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的霍山石斛提取物在制備調(diào)控血糖藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物是以霍山石斛提取物為活性成分的藥物組合物。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的霍山石斛提取物在制備調(diào)控血糖藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物組合物含藥物活性物質(zhì)10-100mg，其余為藥學(xué)上可接受的載體。