[發明專利]一種白芍的組織培養快繁方法

在審

• 申請號: 201710971624.1
• 申請日: 2017-10-18
• 公開（公告）號: CN107484666A
• 公開（公告）日: 2017-12-19
• 發明（設計）人: 陳培黨
• 申請（專利權）人: 陳培黨
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 玉林市振盛專利商標代理事務所45109
• 代理人: 盧翔飛

技術領域

本發明涉及農業生物技術中植物組織培養的方法，具體地說，涉及一種白芍的組織培養快繁方法。

背景技術

白芍又名：白芍藥、杭芍、川芍、毫芍。屬多年生草木，高40~80厘米。根肥大，圓柱形，表面黑褐色或棕黃色。莖直立，光滑無毛。葉互生，下部莖生葉，小葉片狹卵形、橢圓形或披針形，頂端尖，基部楔形，葉面無毛。5~6月開花，花朵大而美麗，白色，有時有深紫色或紅色斑塊，數朵生于枝頂或枝端，花瓣倒卵形。8月結果，果實由3~5個小分果組成，無毛、先端鉤狀向外畜彎。根可入藥，夏、秋季采，鍋內煮至無硬心后除去外皮，或先除外皮再煮，曬干備用。生長于全國大部分地區有分布，多生于山坡、草叢、林下。白芍味苦、酸，性微寒。具有平肝止痛，養血調經，劍陰止汗功效。傳統的白芍獲取方法是野外采挖野生植物資源，易造成水土流失和嚴重土壤沙漠化。此外，白芍種子主要來自野生，其品種混雜，種子稀缺，發芽極低，野生白芍資源已不能適應規?；蜆藴驶a的需要，成為白芍產業發展的最大瓶頸。國內外在植物資源、化學成分分析、生藥鑒定、藥理作用和臨床應用、愈傷組織培養及再分化等方面做了大量的工作。但是，生產中仍然存在許多理論和實踐急需解決的問題。為了謀求產業的發展，引領白芍產業走向高技術、高規格、高水準的科技之路，組織培養已經成為目前研究和開發的熱點。為促進白芍產業化的發展。因此，非常有必要建立白芍離體再生體系，為白芍的產業化發展提供技術支持和提供優良種苗。

發明內容

本發明的目的在于提供一種以白芍帶腋芽莖段為外植體，通過叢生芽誘導、增殖培養、根苗誘導以及試管苗馴化移栽等過程實現白芍的組織培養快速繁殖，為發展中藥材產品特別是白芍種苗提供技術支撐，制作容易，操作簡單，粗壯種苗，良好生長環境，豐產增收的一種白芍的組織培養快繁方法。

本發明的一種白芍的組織培養快繁方法，其特征在于包括以下工藝步驟：

（1）外植體的處理：選取健壯白芍植株上切取帶腋芽的莖段作為外植體，剪去葉片，切成5厘米長的帶有4個腋芽的節段先用洗衣粉水沖洗4h，再用毛輕刷洗外植體表面將其表面的塵土和部分菌體去除，然后用自來水沖洗4h后置于超凈工作臺中，先用75%乙醇消毒35s后用無菌水洗8次，再用0.1%升汞溶液消毒15min，用無菌水沖洗9次再用無菌濾紙擦干表面的水珠后備用；

（2）叢生芽導：將步驟（1）處理后的帶腋芽莖段切成4cm小段并接種到誘導培養基上,先在25℃條件下全暗培養8天，然后置于每天光照15小時，光照強度為3200lx，直至誘導形成叢生芽；

（3）增殖培養：將步驟（2）培養獲得的嫩芽長至約4cm時切離并轉入增殖培養基上進行繼代培養，接種后先在25℃條件下全暗培養6天，然后置于每天光照16小時，光照強度為5200lx，置于培養溫度為25℃的條件下培養，多次反復切割進行繼代培養，以得到更多的叢生芽；

（4）生根培養：當步驟（2）或（3）的叢生芽長至5cm高時，將叢生芽切割成單苗接種至生根培養基中進行生根培養，接種后先在25℃條件下全暗培養6天，然后置于每天光照16小時，光照強度為2500lx，培養溫度為25℃的條件下培養直至長出根；

（5）試管苗移栽：當小苗長出的新根系長達5cm左右時，并且長出側根，苗高5cm以上時，將培養瓶瓶蓋打開并置于自然光照下煉苗6天后，將試管苗從培養瓶中取出，洗掉根部培養基，盡量不傷害根部，栽入經滅菌過的蛭石中。

步驟（2）所述的誘導培養基為：MS+5mg/L NAA+4mg/L 6-BA+3mg/L KT+5%蔗糖+0.8%瓊脂+0.1%活性炭，pH值為5.8。

步驟（3）所述的增殖培養基為：MS+5.0mg/L 6-BA+1.3mg/L NAA+5%蔗糖+0.8%瓊脂+0.3%活性炭，pH值為5.8。

步驟（5）所述的生根培養基為：MS+15mg/L KH₂PO₄+4.0%蔗糖+0.6%瓊脂+0.2%活性炭，pH值為5.8。

本發明的優點是:以白芍帶腋芽莖段為外植體建立白芍離體快繁體系，為解決白芍規模化生產奠定基礎。本發明以帶腋芽莖段為外植體，通過叢生芽誘導、增殖培養、根苗誘導以及試管苗馴化移栽等過程實現了白芍的組織培養快速繁殖，為白芍的產業化發展提供技術支持。技術易撐握，操作方便，得到的種苗健壯，生長發芽快，種苗品種純正，發芽率高，種苗能滿足市場需要。

具體實施方式

以下實施例是對本發明的進一步說明，不是對本發明的限制。

實施例1：