[發(fā)明專利]一種木薯同源四倍體的快速鑒定方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710971147.9
• 申請日: 2017-10-18
• 公開（公告）號: CN107748097A
• 公開（公告）日: 2018-03-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 嚴(yán)華兵;周慧文;曹升;謝向譽(yù);尚小紅;肖亮;曾文丹;陸柳英
• 申請（專利權(quán)）人: 廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物研究所
• 主分類號: G01N1/30
• 分類號: G01N1/30;G01N15/14;G01N21/84
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所11569
• 代理人: 劉奇

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及同源四倍體鑒定技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種木薯同源四倍體的快速鑒定方法。

背景技術(shù)

木薯(ManihotesculentaCrantz)是大戟科(Euphorbiaceae)木薯屬(Manihot)植物，耐旱抗貧瘠，廣泛種植于非洲、美洲和亞洲等100多個國家和地區(qū)，被譽(yù)為“淀粉之王”，是世界近六億人賴以生存的糧食。木薯用途廣泛，除作糧食外，還是重要的工業(yè)原料，如木薯塊根淀粉、干片可制變性淀粉、酒精和山梨醇等，而這些產(chǎn)品又是食品、醫(yī)藥、紡織、造紙等產(chǎn)業(yè)的重要原料。

木薯為二倍體，染色體數(shù)目為2n＝36，是無性繁殖、收獲營養(yǎng)體(木薯塊根)的作物。基于此，木薯四倍體易于誘導(dǎo)獲得，并能通過無性繁殖保持同源四倍體的穩(wěn)定性，這有利于高效地利用四倍體的特點提高收獲產(chǎn)量和植株抗性。但在利用四倍體木薯前，有必要對木薯植株進(jìn)行同源四倍體鑒定，明確其同源四倍體為四倍體后方可利用四倍體木薯進(jìn)行進(jìn)一步研究或生產(chǎn)。

現(xiàn)今鑒定木薯同源四倍體的方法多為：(1)表型鑒定法。優(yōu)點為鑒定速率高，耗費人力物力較少；缺點為準(zhǔn)確率較低。(2)染色體鑒定法。優(yōu)點為結(jié)果準(zhǔn)確可靠；缺點為費時費力，步驟繁瑣，對實驗條件和操作水準(zhǔn)要求較高。(3)流式細(xì)胞儀鑒定法。優(yōu)點為鑒定效率高，結(jié)果準(zhǔn)確；缺點為實驗儀器較為昂貴，鑒定成本過高，且對操作水準(zhǔn)要求較高，部分試劑具有毒性，長期接觸有害身體。現(xiàn)有技術(shù)并沒有一種成本低的快速鑒定木薯同源四倍體的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種木薯同源四倍體的快速鑒定方法。本發(fā)明提供的鑒定方法成本低、速度快、準(zhǔn)確率高，能夠?qū)崿F(xiàn)木薯同源四倍體的高效快速檢測。

本發(fā)明提供了一種木薯同源四倍體的快速鑒定方法，包括以下步驟：

1)用卡諾固定液浸泡木薯葉片，得到固定后的木薯葉片；

2)取步驟1)得到的固定后的木薯葉片的下表皮在碘-碘化鉀染液中進(jìn)行染色，得到染色后的下表皮；

3)將步驟2)得到的染色后的下表皮進(jìn)行顯微觀察，對保衛(wèi)細(xì)胞內(nèi)的葉綠體進(jìn)行計數(shù)，若視野范圍內(nèi)的超過90％的保衛(wèi)細(xì)胞內(nèi)葉綠體數(shù)目≥7，則判定木薯為同源四倍體，若視野范圍內(nèi)的超過90％的保衛(wèi)細(xì)胞內(nèi)葉綠體數(shù)目＜7，則判定木薯為二倍體。

優(yōu)選的是，步驟1)所述木薯葉片選擇高度為0.6～1.0m的木薯植株上的從頂端數(shù)第5～7片完全展開葉。

優(yōu)選的是，步驟2)中下表皮由木薯葉片撕取得到，所述撕取方法包括以下步驟：避開葉脈處，在葉片下表皮劃一十字，掀起十字一角，撕下下表皮。

優(yōu)選的是，步驟1所述浸泡的時間為24h以內(nèi)。

優(yōu)選的是，步驟2)所述染色的時間為30～120s。

優(yōu)選的是，步驟3)來源于同一木薯植株的葉片，至少觀察3個視野。

本發(fā)明提供了一種木薯同源四倍體的快速鑒定方法。本發(fā)明提供的鑒定方法通過對木薯下表皮保衛(wèi)細(xì)胞內(nèi)的葉綠體進(jìn)行計數(shù)，實現(xiàn)木薯同源四倍體的鑒定，操作簡便，成本低，準(zhǔn)確率高，能夠?qū)崿F(xiàn)木薯的快速鑒定。

附圖說明

圖1為本發(fā)明實施例1提供的木薯品種新選048保衛(wèi)細(xì)胞內(nèi)葉綠體數(shù)目示意圖；

圖2為本發(fā)明實施例2提供的木薯品種華南205保衛(wèi)細(xì)胞內(nèi)葉綠體數(shù)目示意圖；

圖3為本發(fā)明實施例3提供的木薯品種南植199保衛(wèi)細(xì)胞內(nèi)葉綠體數(shù)目示意圖。

具體實施方式

本發(fā)明提供了一種木薯同源四倍體的快速鑒定方法，包括以下步驟：

1)用卡諾固定液浸泡木薯葉片，得到固定后的木薯葉片；

2)取步驟1)得到的固定后的木薯葉片的下表皮在碘-碘化鉀染液中進(jìn)行染色，得到染色后的下表皮；

3)將步驟2)得到的染色后的下表皮進(jìn)行顯微觀察，對保衛(wèi)細(xì)胞內(nèi)的葉綠體進(jìn)行計數(shù)，若視野范圍內(nèi)的超過90％的保衛(wèi)細(xì)胞內(nèi)葉綠體數(shù)目≥7，則判定木薯為同源四倍體，若視野范圍內(nèi)的超過90％的保衛(wèi)細(xì)胞內(nèi)葉綠體數(shù)目＜7，則判定木薯為二倍體。

本發(fā)明用卡諾固定液浸泡木薯葉片，得到固定后的木薯葉片。在本發(fā)明中，所述木薯葉片優(yōu)選選擇高度為0.6～1.0m的木薯植株上的從頂端數(shù)第5～7片完全展開葉。本發(fā)明優(yōu)選選取葉片完整，無病蟲害的葉片。本發(fā)明選擇的葉片為成熟葉片，葉綠體數(shù)目達(dá)到最大值，葉片幼嫩，葉綠體生長不成熟，數(shù)目不準(zhǔn)確，葉片過老，葉綠體降解，也會影響檢測結(jié)果。