[發明專利]用于檢測簇毛麥染色體臂的成套分子標記及其應用

有效

• 申請號: 201710970165.5
• 申請日: 2017-10-16
• 公開（公告）號: CN107502675B
• 公開（公告）日: 2020-05-08
• 發明（設計）人: 葉興國;李仕金;林志珊;王靜;王坤楊;王軻;陳競男;杜麗璞;劉暢
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院作物科學研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;張立娜

本發明公開了一種用于檢測簇毛麥染色體臂的成套分子標記及其應用。本發明提供了用于檢測簇毛麥染色體臂的成套引物，由用于檢測簇毛麥2V、3V、4V、6V和7V染色體臂的引物對(序列表中序列1?28所示的14個引物對)中的全部或部分組成。本發明利用RNA?seq技術獲得了簇毛麥的轉錄組序列，在轉錄組序列的基礎上，設計引物，篩選能準確鑒定簇毛麥各條染色體的特異標記并設計相應的擴增引物。實驗證明，采用本發明所提供的成套引物可以實現對簇毛麥各條染色體的特異性檢測，已成功應用于硬?簇雙二倍體與小麥雜交及回交后代材料中簇毛麥染色體的檢測工作。本發明為簇毛麥的進一步研究和利用提供了更便捷有效的工具。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種用于檢測簇毛麥染色體臂的成套分子標記及其應用。

背景技術

簇毛麥Dasypyrum villosum(L.)P.Candargy(syn.Haynaldia villosa Schur)是小麥族簇毛麥屬的一年生或多年生常異花授粉二倍體植物(2n＝2x＝14，Sears將簇毛麥基因組命名為VV)。它起源于地中海的東北部，從南歐的法國南部到里海，西南亞，俄羅斯和高加索地區，是一種雜草類植物，生長在惡劣、干旱的環境中。由于其穎殼脊上和外稃頂端有叢生的毛狀物，故名之。簇毛麥具有抗條銹、葉銹、稈銹病、白粉病和小麥梭條花葉病毒等多種小麥主要病蟲害的特性，同時具有耐寒、分蘗力強、生長繁茂、多小花、蛋白質含量高和耐鹽抗旱等特性。簇毛麥含有許多生物脅迫和非生物脅迫抗性基因及優質基因，是改良小麥的優良基因源。

開發簇毛麥不同染色體臂和不同染色體區段的分子標記，對于將簇毛麥中蘊藏的抗病、抗逆和優質基因以染色體易位方式導入小麥至關重要。截止目前，對二倍體簇毛麥的研究利用還不夠，需要加強，如對其特定染色體上的特異性DNA片段進行克隆、分子標記開發的報道還較少。有關簇毛麥特異標記已有一些報道，但大多集中于6VS染色體，分布于1V至7V染色體的目前主要有SSR、ISSR、EST-STS標記，利用這些標記來鑒定大量的簇毛麥結構變異染色體，遠遠不能滿足大量開展的簇毛麥優異基因向小麥中轉移的分子遺傳與育種學研究的需要。因此，需要繼續發掘簇毛麥染色體上的特異分子標記，對于在小麥育種研究過程中快速有效地跟蹤、檢測和鑒定導入到小麥中的簇毛麥染色體臂及其片段具有極為重要的意義。

發明內容

本發明的目的是提供一種用于檢測簇毛麥染色體臂的成套分子標記及其應用。

第一，本發明請求保護一種用于檢測簇毛麥染色體臂的成套引物。

本發明所請求保護的用于檢測簇毛麥染色體臂的成套引物，具體由用于檢測簇毛麥2V染色體臂的引物對、用于檢測簇毛麥3V染色體臂的引物對、用于檢測簇毛麥4V染色體臂的引物對、用于檢測簇毛麥6V染色體臂的引物對和用于檢測簇毛麥7V染色體臂的引物對中的全部或部分組成。

所述用于檢測簇毛麥2V染色體臂的引物對為引物對1；所述用于檢測簇毛麥3V染色體臂的引物對為引物對2或引物對3或引物對4或引物對5；所述用于檢測簇毛麥4V染色體臂的引物對為引物對6或引物對7或引物對8或引物對9；所述用于檢測簇毛麥6V染色體臂的引物對為引物對10或引物對11或引物對12；所述用于檢測簇毛麥7V染色體臂的引物對為引物對13或引物對14。

所述引物對1為如下(a1)或(b1)：

(a1)由序列表中序列1和序列2所示的兩條引物組成的引物對；

(b1)由將序列表中序列1和序列2經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條引物組成且具有相同功能的引物對。

所述引物對2為如下(a2)或(b2)：

(a2)由序列表中序列3和序列4所示的兩條引物組成的引物對；