[發明專利]一種檢測先天性心臟病微缺失或/和微重復的引物組合、MLPA探針、基因芯片及試劑盒

有效

• 申請號: 201710963634.0
• 申請日: 2017-10-17
• 公開（公告）號: CN107841552B
• 公開（公告）日: 2021-04-30
• 發明（設計）人: 王彬彬;王晶
• 申請（專利權）人: 國家衛生計生委科學技術研究所;首都醫科大學
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 北京元本知識產權代理事務所(普通合伙) 11308
• 代理人: 秦力軍

本發明提供一種檢測先天性心臟病微缺失或/和微重復位點的引物組合、MLPA探針、基因芯片及試劑盒，涉及生物技術領域，所述引物組合、MLPA探針、基因芯片及試劑盒均具有如SEQ ID NO.1?66所示的核苷酸序列。本發明提供的引物組合、MLPA探針、基因芯片及試劑盒可以同時檢測多個位點的先天性心臟病微缺失，特異性好，反應靈敏，檢測時間短，方法簡單、從點突變到大染色體缺失/插入都可以進行檢測，成本低廉，臨床應用價值高。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種檢測先天性心臟病微缺失或/和微重復的引物組合、MLPA探針、基因芯片及試劑盒。

背景技術

先天性心臟病(congernital heart diseases，CHD)現已成為廣泛發生一種先天性出生缺陷。我國每年約有15-20萬先天性心臟病患兒出生，在新生兒中其發病率約為0.7-1.0％，是新生兒非感染性死亡的重要死亡原因之一。先天性心臟病按照有無合并其他畸形大致分為兩類，一類為孤立型的先天性心臟病，另一類為綜合征型先天性心臟病。綜合征型先天性心臟病患兒多呈現出典型的外貌特征，伴或不伴有不同程度智力或生長發育異常及先天性多器官發育畸形等，其常見綜合征型先天性心臟病為Down氏綜合征，Holt-Oram綜合征，努南綜合征，DiGeoge綜合征等。

近年來，大量流行病學調查研究顯示多種因素包括遺傳因素，環境因素及其二者的共同作用參與了先天性心臟病的發生，其中，遺傳因素與先天性心臟病發生密切相關，其中染色體微缺失和微重復也是胚胎染色體異常的常見類型。染色體微缺失/微重復是指染色體上出現長度為1.5kb-10Mb的缺失或重復。盡管每種微缺失綜合征發病率都很低，如較常見的22q11微缺失綜合征發生率為1∶4000，但由于臨床檢測技術的限制，大量的微缺失綜合征患者在產前篩查和產前診斷中無法檢出，更為重要的是作為胚胎植入前診斷的最主要的樣本類型，平衡易位患者的胚胎必須通過分析微重復和微缺失來判定胚胎是否發生異常。因此，如果在試管嬰兒技術中能夠避免移植有染色體微缺失/微重復的胚胎，將具有很重要的意義。

目前微缺失綜合征的診斷技術主要包括高分辨率核型分析、熒光原位雜交、BoBs液態基因芯片檢測或微陣列比較基因組雜交，其中，高分辨率核型分析方法僅能發現少部分較大片段的微缺失異常，熒光原位雜交方法特異性好，但是只能進行靶向性診斷。

發明內容

為解決現有技術存在的只能一次檢測一個位點的問題，本發明提供一種可以同時快速檢測先天性心臟病微缺失或/和微重復的試劑盒，使用本發明提供的引物、MLPA探針或基因芯片方法簡單，成本低廉，臨床應用價值高。

為實現本發明的技術目的，本發明一方面提供一種檢測先天性心臟病微缺失或/和微重復的引物組合，其具有如SEQ ID NO.1-66所示的核苷酸序列。

其中，所述引物組合是基于NIPA2基因、SH2B1基因、GJA5基因、TBX1基因、CRKL基因、MAPKK1基因、EEF2K基因、CDR2基因、MHY11基因和GATA4基因設計的多個引物對，其依次具有SEQ ID NO.1-66所示的核苷酸序列。

為實現本發明的技術目的，本發明另一方面提供一種檢測先天性心臟病微缺失或/和微重復的MLPA探針組合，其具有如SEQ ID NO.1-66所示的核苷酸序列。

其中，所述每個MLPA探針上具有熒光標記和通用引物。

其中，所述通用引物對依次具有如SEQ ID NO.67-68所示的核苷酸序列。

為實現本發明的技術目的，本發明再一方面提供一種檢測先天性心臟病微缺失或/和微重復的試劑盒，其包括上述的引物組合或上述的MLPA探針組合。

其中，所述試劑盒還包括反應液。

其中，所述反應液包括常規的用于MLPA雜交連接反應的緩沖劑、連接酶、聚合酶以及用于PCR反應的緩沖劑、連接酶、聚合酶或其他相關試劑。