[發明專利]從富血小板血漿制備血小板裂解物的方法

在審

• 申請號: 201710962767.6
• 申請日: 2012-07-06
• 公開（公告）號: CN107746830A
• 公開（公告）日: 2018-03-02
• 發明（設計）人: T·A·霍澤;M·J·埃文斯;A·雷金納德;I·L·彼佩爾;B·L·珀金斯
• 申請（專利權）人: 細胞治療有限公司
• 主分類號: C12N5/0786
• 分類號: C12N5/0786
• 代理公司: 北京三友知識產權代理有限公司11127
• 代理人: 丁香蘭,龐東成

本申請是分案申請，其原申請的申請號為201280033446.3，申請日為2012年7月6日，發明名稱為“中胚層譜系祖細胞”。

技術領域

本發明涉及中胚層譜系祖細胞及其治療應用以及制備血小板裂解物的方法。

背景技術

間充質干細胞(MSC)是多能的成體干細胞。MSC分化形成見于骨骼組織中的不同的特化細胞。例如，它們能分化為軟骨的細胞(軟骨細胞(chondrocyte))、骨細胞(成骨細胞)和脂肪的細胞(脂肪細胞(adipocyte))。

MSC用于多種療法中，例如對年齡相關性黃斑變性(AMD)和心肌梗塞的治療。一旦被施用至患者，MSC通常會遷移(或歸巢)至受損的組織處并通過旁分泌信號傳導以及通過促進受損組織中的相鄰細胞的存活、修復和再生而發揮其治療效果。

目前的療法通常涉及MSC亞型混合物的輸注，而這些亞型中的某些并不能高效地遷移至所關注的組織。這使得需要使用高的細胞劑量，而這可能導致離靶(off-target)副作用和體積相關的副作用。MSC通常獲自骨髓，因此其難以大量獲得。

發明內容

本發明人令人驚訝地鑒定出了一類新的具有特定標志物表達譜的中胚層譜系祖細胞(PML)。本發明的PML的同源群能從單個核細胞(MC)(例如外周血MC)中分離出。所述PML能夠高效地遷移至受損組織并對其進行修復。

本發明提供了一種中胚層譜系祖細胞，其中，所述細胞(a)表達可檢測水平的CD29、CD44、CD73、CD90、CD105和CD271并且(b)不表達可檢測水平的CD14、CD34和CD45。

本發明還提供了：

-包含兩種以上的本發明的祖細胞的群；

-一種藥物組合物，其包含(a)本發明的祖細胞或本發明的群以及(b)藥物可接受的載劑或稀釋劑；

-一種制備本發明的群的方法，其包括：(a)在誘導單個核細胞(MC)分化為中胚層譜系祖細胞的條件下培養MC；和(b)收集具有本發明的表達譜的祖細胞并進行培養，由此制備本發明的群；

-一種修復患者的受損組織的方法，其包括對患者施用本發明的群并由此修復患者的受損組織，其中所述群包含治療有效數量的細胞；和

-用于修復患者的受損組織的本發明的群。

附圖說明

圖1顯示了RT-PCR凝膠，其證實了本發明的PML中存在CD44而不存在CD34。

圖2顯示了對本發明的PML的FACS分析的結果。這證實了所述細胞至少呈CD73和CD90陽性，而對CD14、CD34和CD45呈陰性。

圖3顯示了來自FACS分析的進一步結果，即針對CD90(上圖)和CD73(下圖)的柱形圖。

圖4顯示了在染色的細胞(圖4a)和未染色的細胞(圖4b)中缺乏CD14、CD34和CD45的FACS柱形圖。

圖5顯示了中胚層譜系祖細胞以時間依賴性和CXCR4依賴性方式遷移至骨折部位。在接受了PML-P-Act-Luc(PML)(左列)、PML-fl-Act-Luc-CXCR4+(CXCR4(+))(中列)或PML-P-Act-Luc-CXCR4-(CXCR4(-))(右列)移植物的脛骨骨折的小鼠骨折/移植后的第1天(第1行)、第3天(第2行)、第7天(第3行)和第14天(第4行)進行生物發光分析。

具體實施方式

應該理解，針對本領域的具體需要，可以對所公開的產品和方法的不同應用進行定制。此外還應理解，本文所用的術語的目的僅在于描述本發明的特定實施方式，而非意在進行限制。

另外，除非文中明確地另有規定，本說明書和所附權利要求書中所用的單數形式“一個”、“一種”和“所述”都包括復數的指代物。因此，例如，對于“一個細胞”的指代包括“多個細胞”，對于“一種組織”的指代包括兩種以上的組織，對于“一位患者”的指代包括兩位以上的患者，等等。

本文中所引用的所有出版物、專利和專利申請，不論在上文還是下文中，均通過援引將其全部內容并入本文中。

本發明的PML

本發明提供了一種中胚層譜系祖細胞(PML)。所述PML表達可檢測水平的CD29,CD44,CD73,CD90,CD105和CD271，但不表達可檢測水平的CD14,CD34和CD45。

本發明的PML具有許多優點。在此將總結其主要優點。然而，根據下文的討論，其它優點將變得顯而易見。