[發明專利]一種產唾液酸乳糖大腸桿菌工程菌株的構建方法

在審

• 申請號: 201710962719.7
• 申請日: 2017-10-17
• 公開（公告）號: CN107904253A
• 公開（公告）日: 2018-04-13
• 發明（設計）人: 王夢楠;楊靜華;陶勇;金城
• 申請（專利權）人: 中國科學院微生物研究所;中國科學院大學
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C12N1/21;C12P19/12;C12R1/19
• 代理公司: 北京律和信知識產權代理事務所(普通合伙)11446
• 代理人: 武玉琴,劉國偉

1.一種產唾液酸乳糖大腸桿菌工程菌株的構建方法，其特征在于，包括：

敲除大腸桿菌中聚唾液酸轉移酶基因(neuS)和敲除β-半乳糖苷酶基因(lacZ)，獲得ΔneuSΔlacZ雙缺陷型的菌株；

將重組質粒BNst轉化到ΔneuSΔlacZ雙缺陷型的菌株中，獲得工程菌E.coli K1-ΔneuSΔlacZ-BNst。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在ΔneuSΔlacZ雙缺陷型的菌株的基礎上進一步敲除分解N-乙酰神經氨酸相關的基因(nanA)，獲得ΔneuSΔlacZΔnanA缺陷型的菌株，將重組質粒BNst轉化到ΔneuSΔlacZΔnanA缺陷型的菌株，獲得了E.coli K1-ΔneuSΔlacZΔnanA-BNst工程菌。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在ΔneuSΔlacZ雙缺陷型的菌株的基礎上進一步敲除分解N-乙酰神經氨酸相關的基因簇(nanKETA)，獲得ΔneuSΔlacZΔnanKETA缺陷型的菌株，將重組質粒BNst轉化到ΔneuSΔlacZΔnanKETA缺陷型的菌株，獲得了E.coli K1-ΔneuSΔlacZΔnanKETA-BNst工程菌。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述的ΔneuSΔlacZΔnanKETA缺陷型的菌株，將重組質粒pCC1s-Nst轉化到其中，得到菌株E.coli K1-ΔneuSΔlacZΔnanKETApCC1s-Nst。

5.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述的ΔneuSΔlacZΔnanKETA缺陷型的菌株，將重組質粒pXC1k-Nst轉化到其中，得到菌株K1-KETA-pNst。

6.一株大腸桿菌(Escherichia coli)菌株K1-KETA-pNst CGMCC No.14825。

7.一種菌株K1-KETA-pNst在發酵制備唾液酸乳糖中的應用。