[發明專利]一種動物心臟單細胞懸液的制備及檢測方法

在審

• 申請號: 201710960103.6
• 申請日: 2017-10-16
• 公開（公告）號: CN107748130A
• 公開（公告）日: 2018-03-02
• 發明（設計）人: 劉鳴
• 申請（專利權）人: 上海市普陀區中心醫院
• 主分類號: G01N15/14
• 分類號: G01N15/14;G01N1/28
• 代理公司: 上海信好專利代理事務所(普通合伙)31249
• 代理人: 周乃鑫

1.一種動物心臟單細胞懸液的制備方法，其特征在于，該方法包含：

步驟1：制作動物心臟缺血再灌注模型；

步驟2：取動物離體心臟組織，沖洗去除血液，加入心臟消化液，剪碎，混勻消化；

步驟3：過濾步驟2得到的混合溶液，離心，去除上清液，終止消化，加入磷酸鹽緩沖液懸浮，加入紅細胞裂解液，離心，去除上清液，加入磷酸鹽緩沖液懸浮，得到動物心臟單細胞懸液。

2.根據權利要求1所述的動物心臟單細胞懸液的制備方法，其特征在于，在步驟2中，所述的心臟消化液包含：RPMI-1640培養基，Collagenase I和DNase；

所述的心臟消化液的質量：動物離體心臟組織的體積為1.8~2.2g：11mL。

3.根據權利要求2所述的動物心臟單細胞懸液的制備方法，其特征在于，在步驟2中，所述的RPMI-1640培養基的體積：Collagenase I的質量：DNase的質量=1mL：1.6mg：0.2mg。

4.根據權利要求3所述的動物心臟單細胞懸液的制備方法，其特征在于，在步驟2中，所述的動物心臟組織采用磷酸鹽緩沖液沖洗以去除血液。

5.根據權利要求1-4中任意一項所述的動物心臟單細胞懸液的制備方法，其特征在于，在步驟2中，所述的消化在室溫條件下進行，消化60min并間斷混勻。

6.根據權利要求5所述的動物心臟單細胞懸液的制備方法，其特征在于，在步驟3中，所述的過濾采用140目的濾網。

7.根據權利要求6所述的動物心臟單細胞懸液的制備方法，其特征在于，在步驟3中，所述的離心的速度為1000~1200rpm，第一次離心的時間為10min，第二次離心的時間為5min。

8.根據權利要求6或7所述的動物心臟單細胞懸液的制備方法，其特征在于，在步驟3中，所述的混合溶液中加入的磷酸鹽緩沖液與紅細胞裂解液的體積比為1：10。

9.根據權利要求8所述的動物心臟單細胞懸液的制備方法，其特征在于，所述的動物為小鼠。

10.一種動物心臟單細胞懸液的檢測方法，其特征在于，該檢測方法檢測的動物心臟單細胞懸液通過如權利要求1-9中任意一項所述的動物心臟單細胞懸液的制備方法獲得，該檢測方法包含：

取動物心臟單細胞懸液，加入CD45、CD11c和Ly6C的抗體或同型對照，標記所述的動物心臟單細胞懸液中的白細胞，以及樹突狀細胞和單核細胞，磷酸鹽緩沖液沖洗，避光，流式細胞檢測；

選取所述的CD45的抗體或同型對照標記的白細胞，再分析CD45陽性細胞中被標記了CD11c，Ly6C的細胞亞群。