[發(fā)明專(zhuān)利]生物防治

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710958978.2
• 申請(qǐng)日: 2013-03-05
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108018309A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-05-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: L·阿爾菲
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 奧西泰克有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/85
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/85;C12N9/22;A01K67/033;G01N33/58
• 代理公司: 中科專(zhuān)利商標(biāo)代理有限責(zé)任公司 11021
• 代理人: 張國(guó)梁

1.一種適于在節(jié)肢動(dòng)物雄性生殖系中條件表達(dá)效應(yīng)物基因的節(jié)肢動(dòng)物雄性生殖系基因表達(dá)系統(tǒng)，所述系統(tǒng)包括：

-第一表達(dá)單元，所述第一表達(dá)單元包含效應(yīng)物基因和與其可操作連接的用于其的啟動(dòng)子；

-第二表達(dá)單元，所述第二表達(dá)單元包含轉(zhuǎn)錄因子的編碼序列和可操作連接于其的上游調(diào)控元件，所述轉(zhuǎn)錄因子能夠作用于第一表達(dá)單元的啟動(dòng)子上以驅(qū)動(dòng)效應(yīng)物基因的表達(dá)，所述上游調(diào)控元件包括：

-轉(zhuǎn)錄因子的啟動(dòng)子；和

-臨近轉(zhuǎn)錄因子編碼序列起始位點(diǎn)的5’UTR；

所述上游調(diào)控元件驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄因子的足量表達(dá)，從而轉(zhuǎn)錄因子蛋白轉(zhuǎn)而在減數(shù)分裂前驅(qū)動(dòng)效應(yīng)物基因的轉(zhuǎn)錄。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基因表達(dá)系統(tǒng)，其中所述轉(zhuǎn)錄因子是轉(zhuǎn)錄激活劑，如tTA，GAL4或它們的變體。

3.根據(jù)任一項(xiàng)在前權(quán)利要求所述的基因表達(dá)系統(tǒng)，其中所述效應(yīng)物是核酸內(nèi)切酶，最優(yōu)選為3-鋅指核酸酶。

4.根據(jù)任一項(xiàng)在前權(quán)利要求所述的基因表達(dá)系統(tǒng)，其中第一表達(dá)單元的啟動(dòng)子是最小啟動(dòng)子。

5.根據(jù)任一項(xiàng)在前權(quán)利要求所述的基因表達(dá)系統(tǒng)，其中第二表達(dá)單元中上游調(diào)控元件的啟動(dòng)子大多來(lái)自topi，aly或β-2微管蛋白(B2T)或其同源物。

6.根據(jù)任一項(xiàng)在前權(quán)利要求所述的基因表達(dá)系統(tǒng)，其中第二表達(dá)單元的上游調(diào)控元件中的5’UTR是來(lái)自hsp83，優(yōu)選來(lái)自地中海果蠅或hsp83的同源物，特別是在目標(biāo)節(jié)肢動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)的hsp83同源物的5’UTR。

7.根據(jù)任一項(xiàng)在前權(quán)利要求所述的基因表達(dá)系統(tǒng)，其中使用Ga14-UAS系統(tǒng)，從而轉(zhuǎn)錄因子是GAL4。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的基因表達(dá)系統(tǒng)，其中所述系統(tǒng)是誘導(dǎo)型系統(tǒng)，其中誘導(dǎo)通過(guò)提供化學(xué)實(shí)體發(fā)生，如通過(guò)提供四環(huán)素發(fā)生，或通過(guò)提供四環(huán)素的類(lèi)似物之一發(fā)生，所述四環(huán)素的類(lèi)似物包括多西環(huán)素。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的基因表達(dá)系統(tǒng)，其中第二表達(dá)單元中的轉(zhuǎn)錄因子是tTA或其變體(tTAV，tTAV2，tTAV3)。

10.根據(jù)任一項(xiàng)在前權(quán)利要求所述的基因表達(dá)系統(tǒng)，其中第二表達(dá)單元的轉(zhuǎn)錄因子是tTA或變體并且所述第一表達(dá)單元包括tet操縱子(tetO)。

11.根據(jù)任一項(xiàng)在前權(quán)利要求所述的基因表達(dá)系統(tǒng)，其中所述節(jié)肢動(dòng)物是昆蟲(chóng)，優(yōu)選雙翅目(Dipteran)，包括實(shí)蠅科(Tephritid)，如地中海果蠅或橄欖果蠅。

12.根據(jù)任一項(xiàng)在前權(quán)利要求所述的基因表達(dá)系統(tǒng)，其中所述效應(yīng)物是核酸酶并賦予或給予父本效應(yīng)致死性。

13.一種在性腺或精子中表達(dá)效應(yīng)物蛋白的方法，所述方法包括用根據(jù)任一項(xiàng)在前權(quán)利要求的表達(dá)系統(tǒng)轉(zhuǎn)化所述性腺。

14.一種群體控制的方法，所述方法包括在雄性節(jié)肢動(dòng)物的性腺中表達(dá)根據(jù)權(quán)利要求1-12任一項(xiàng)所述的表達(dá)系統(tǒng)的效應(yīng)物蛋白。

15.一種抗性管理方法，所述方法包括使用根據(jù)權(quán)利要求1-12任一項(xiàng)所述的表達(dá)系統(tǒng)。

16.一種質(zhì)量控制方法，所述方法包括：包括報(bào)道分子如熒光蛋白作為根據(jù)權(quán)利要求1-12任一項(xiàng)所述的表達(dá)系統(tǒng)中的效應(yīng)物蛋白，或在根據(jù)權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)的表達(dá)系統(tǒng)中的效應(yīng)物蛋白之外包括報(bào)道分子如熒光蛋白，從而來(lái)自所述系統(tǒng)的表達(dá)被誘導(dǎo)或去抑制的個(gè)體在合適波長(zhǎng)的光下變得可見(jiàn)。

17.一種確定雌性節(jié)肢動(dòng)物的交配狀況的方法，所述方法包括在轉(zhuǎn)基因雄性群體中使用根據(jù)權(quán)利要求1-12任一項(xiàng)所述的表達(dá)系統(tǒng)，其中所述系統(tǒng)包含標(biāo)記如熒光報(bào)道蛋白；并且精子存在時(shí)，測(cè)定雌性中所述標(biāo)記的存在；標(biāo)記的存在表示雌性已經(jīng)與攜帶所述系統(tǒng)的轉(zhuǎn)基因雄性交配。