[發(fā)明專(zhuān)利]一株熒光假單胞菌及其在防治核桃黑斑病中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710958437.X
• 申請(qǐng)日: 2017-10-16
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107502584B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-10-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 段春華;李宗泰;牛贍光;張淑靜;劉慇;王清海;曲永赟
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 山東省林業(yè)科學(xué)研究院
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/20
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/20;A01N63/00;A01P1/00;C12R1/39
• 代理公司: 濟(jì)南誠(chéng)智商標(biāo)專(zhuān)利事務(wù)所有限公司 37105
• 代理人: 韓百翠

本發(fā)明公開(kāi)了一株熒光假單胞菌及其在防治核桃黑斑病中的應(yīng)用。該菌株為熒光假單胞菌(Pseudomonas fluorescens)菌株GH2?1，保藏號(hào)為CGMCC No.14743。實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的熒光假單胞菌菌株具有生長(zhǎng)速度快、抗逆性強(qiáng)，在核桃表面能夠快速大量定殖等特點(diǎn)，因此具有良好的應(yīng)用前景。由該熒光假單胞菌制備的生物防治制劑，不僅能夠高效的防治核桃黑斑病害，還能有效促進(jìn)核桃生長(zhǎng)，是一種極具應(yīng)用前景的生物防治制劑。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物病害生物防治技術(shù)領(lǐng)域。具體而言，本發(fā)明涉及一株熒光假單胞菌及其在防治核桃黑斑病中的應(yīng)用，以及采用該熒光假單胞菌制備的生物防治制劑。

背景技術(shù)

核桃黑斑病[Xanthomonas jugandis(Pierce)Dowson]，又名核桃黑腐病，在歐美一些國(guó)家發(fā)病率較高。在我國(guó)，該病廣泛分布于河北、山東、山西、遼寧、河南、江蘇、浙江、四川、云南、山西、甘肅等省核桃產(chǎn)區(qū)。核桃黑斑病由核桃黃極毛桿菌[Xanthomonas jugandis(Pierce)Dowson]引起，主要危害葉片、嫩枝、幼果及花器，每年4月～8月發(fā)病。葉片感病后，在葉片上出現(xiàn)圓形及多角形小褐斑，嚴(yán)重時(shí)相連成片，病斑外圍有水漬狀暈圈；枝梢上病斑長(zhǎng)形，黑褐色，稍凹陷，嚴(yán)重時(shí)因病斑擴(kuò)展包圍枝條而使上段枯死；花序受侵后，產(chǎn)生黑褐色水漬狀病斑；幼果受害時(shí)，果面發(fā)生黑色小斑點(diǎn)，無(wú)明顯邊緣，逐漸擴(kuò)大成片變黑，并深入果肉，使整個(gè)果實(shí)連同核仁全部變黑腐爛脫落。近年來(lái)由于我國(guó)核桃栽培面積的增大，核桃黑斑病病害問(wèn)題也日漸突出，在花期降雨偏多的年份更為嚴(yán)重，該病導(dǎo)致落果嚴(yán)重，嚴(yán)重時(shí)落果率達(dá)60％以上，甚至絕收。

目前防治核桃黑斑病主要以化學(xué)農(nóng)藥為主，但化學(xué)農(nóng)藥的高殘留對(duì)環(huán)境的污染嚴(yán)重。大量農(nóng)藥揮發(fā)到空氣中、流入水體中、沉降聚集在土壤中，污染農(nóng)畜漁果產(chǎn)品，并通過(guò)食物鏈的富集作用轉(zhuǎn)移到人體內(nèi)，對(duì)人體產(chǎn)生危害，因而目前化學(xué)防治方法仍然不能行之有效地解決核桃細(xì)菌性黑斑病問(wèn)題。生物防治是利用物種間的拮抗作用來(lái)減少病害的發(fā)生，對(duì)人畜安全、環(huán)境兼容性好且病原菌不易產(chǎn)生抗藥性，因而具有化學(xué)殺菌劑不具有的優(yōu)勢(shì)，正逐步成為代替化學(xué)殺菌劑的最佳方式。而獲得高效拮抗菌是生物防治的基礎(chǔ)。

熒光假單胞菌(Pseudomonas fluorescens)屬革蘭氏陰性桿狀細(xì)菌，常見(jiàn)于植物根圍和土壤中，是作為植物根際促生細(xì)菌中研究較多的一種細(xì)菌，由于其繁殖速度快、適應(yīng)能力強(qiáng)、易于人工培養(yǎng)、制劑穩(wěn)定、施用方便、不污染環(huán)境、防治多種植物病害等優(yōu)點(diǎn)，我國(guó)農(nóng)業(yè)部已將其列為可注冊(cè)登記的微生物農(nóng)藥和肥料品種之一，在全國(guó)范圍內(nèi)推廣使用。由于其能產(chǎn)生一種或多種抗生素，所以對(duì)植物病害，尤其是土傳病害如猝倒病、根腐病、枯萎病等均有很好的防治作用，是一類(lèi)重要的有益微生物資源，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上具有非常重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一株用于高效防治核桃黑斑病的新的微生物——熒光假單胞菌菌株GH2-1。本發(fā)明的熒光假單胞菌菌株具有生長(zhǎng)速度快、抗逆性強(qiáng)，在核桃表面能夠快速大量定殖等特點(diǎn)，因此具有良好的應(yīng)用前景。

本發(fā)明的上述目的是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：本發(fā)明所提供的菌株為熒光假單胞菌(Pseudomonas fluorescens)菌株GH2-1，是從山東省青島市萊西市萊西湖泥中分離獲得的，已于2017年9月26日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱(chēng)CGMCC，地址：北京市朝陽(yáng)區(qū)大屯路，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所)，保藏號(hào)為CGMCC No.14743。其具有以下生物學(xué)特性：在牛肉膏培養(yǎng)基上菌落微隆起，淡黃色，邊緣呈波浪花紋向外擴(kuò)展?fàn)睿砻孑^濕潤(rùn)，易用接種針挑起，產(chǎn)生水溶性黃綠色色素，紫外光斜光照射下可見(jiàn)黃綠色熒光；鏡檢，菌體細(xì)胞呈桿狀，具極生鞭毛，能運(yùn)動(dòng)；經(jīng)革蘭氏染色呈陰性(以大腸桿菌為對(duì)照)；不產(chǎn)芽孢和莢膜。

本發(fā)明熒光假單胞菌(P.fluorescens)菌株GH2-1的培養(yǎng)方法或繁殖方法包括：