[發(fā)明專利]基于EML4-ALK抗體的isPLA技術(shù)在檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌中的應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710957412.8
• 申請(qǐng)日: 2017-10-16
• 公開（公告）號(hào): CN108333356A
• 公開（公告）日: 2018-07-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張炬;吳金蕓
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 伯仕利生物科技發(fā)展（鹽城）有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/577
• 分類號(hào): G01N33/577;G01N33/574
• 代理公司: 蘇州翔遠(yuǎn)專利代理事務(wù)所(普通合伙) 32251
• 代理人: 姜微微

一種ALK(3B12)和EML4(1D11)單抗結(jié)合原位鄰位連接isPLA技術(shù)在檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌中的應(yīng)用。本發(fā)明利用單抗技術(shù)制備了兩株分別識(shí)別EML4和ALK的高親和性單克隆抗體，并以其為鄰位探針建立了一種新型EML4?ALK檢測(cè)技術(shù)——基于新型EML4和ALK抗體的isPLA技術(shù)。該技術(shù)具有高效、靈敏、經(jīng)濟(jì)、便捷等優(yōu)點(diǎn)，并可能應(yīng)用于臨床診斷，為今后腫瘤標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)的檢測(cè)提供了新的方向。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種基于EML4-ALK抗體的isPLA技術(shù)在檢測(cè)非小細(xì)胞 肺癌中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

肺癌是肺組織內(nèi)細(xì)胞生長(zhǎng)失去控制而導(dǎo)致的一種疾病。在過(guò)去的半個(gè)多世紀(jì)中，肺癌的 發(fā)病率和死亡率逐年增加，已經(jīng)從20世紀(jì)初的一種罕見疾病發(fā)展為當(dāng)今的全球頭號(hào)癌癥殺 手。根據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)定期公布的資料，肺癌的發(fā)病率和死亡率在世界各國(guó)尤其 是發(fā)達(dá)國(guó)家呈明顯的上升趨勢(shì)，已經(jīng)成為許多發(fā)達(dá)國(guó)家最常見的腫瘤，位列男性常見惡性腫 瘤第一位和女性常見惡性腫瘤第二位，并且成為惡性腫瘤中最常見的死亡原因。在我國(guó)，男 性肺癌年齡標(biāo)準(zhǔn)化發(fā)病率為47.51/10萬(wàn)，女性肺癌年齡標(biāo)準(zhǔn)化發(fā)病率為22.69/10萬(wàn)，并且呈 逐年增加的趨勢(shì)，參見，She J,Yang P,Hong Q,等人Lung cancer in China:challenges and interventions[J].Chest.2013,143(4):1117-1126。預(yù)計(jì)到2025年，我國(guó)每年僅死于肺癌的人數(shù)就 將接近100萬(wàn)，成為世界第一肺癌大國(guó)。

根據(jù)肺癌細(xì)胞的分化程度和形態(tài)特征，臨床上將其分為小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌 (non-small lung cancer,NSCLC)兩類，其中非小細(xì)胞肺癌占到85％左右。根據(jù)預(yù)后情況，幾種 非小細(xì)胞肺癌又可以歸為三類：鱗狀細(xì)胞癌、肺腺癌和大細(xì)胞肺癌。盡管診斷方法和治療手 段都有了很大的進(jìn)步，70％的NSCLC患者在初次確診時(shí)大多已處于ⅢB/Ⅳ期，其中約40％ 的患者失去手術(shù)治療的機(jī)會(huì)，5年生存率往往低于5％，參見Molina J R,Yang P,Cassivi S D, 等人Non-small cell lung cancer:epidemiology,risk factors,treatment,and survivorship[J].Mayo Clin Proc.2008,83(5):584-594。因此，針對(duì)該疾病分子起源和疾病發(fā)生發(fā)展過(guò)程的研究，對(duì)其預(yù)防 和治療具有重要意義。

非小細(xì)胞肺癌(Non-small-cell carcinoma NSCLC)是世界上癌癥相關(guān)死亡的首要原因。每 年大概有120萬(wàn)患者被診斷出非小細(xì)胞肺癌，同時(shí)，110萬(wàn)人死于該癥。雖然在過(guò)去的數(shù)據(jù) 十年中對(duì)NSCLC進(jìn)行大量的研究，NSCLC患者的五年存活期依然很低。腫瘤結(jié)節(jié)轉(zhuǎn)移 (TNM)分期系統(tǒng)在國(guó)際上廣為認(rèn)可，用于NSCLC的預(yù)后預(yù)測(cè)。盡管如此，早期的患者顯示出變化范圍較大的生存率，這就使得尋找能更好的預(yù)測(cè)結(jié)果的有效預(yù)后標(biāo)志物成為必須。因 此，人們?cè)诮梃b可改善NSCLC診斷的分子標(biāo)志物方面做了大量的工作。適合的標(biāo)志物不僅 能提供預(yù)后信息，而且，也有助于預(yù)測(cè)患者是否可以受惠于新的治療策略或額外的治療措 施。

隨著肺癌個(gè)性化治療研究的不斷深入，漸變性淋巴激酶(anaplastic lymphomakinase， ALK)酪氨酸激酶受體(tyrosine kinase receptor，TKR)逐漸發(fā)展為的一個(gè)重要的NSCLC 標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)，其代表性的亞型是棘皮動(dòng)物微管相關(guān)蛋白4-漸變性淋巴激酶(echinoderm microtubule associated protein like 4-anaplastic lymphoma kinase,EML4-ALK) 融合基因。