[發(fā)明專利]一種畢赤酵母生產(chǎn)肝臟解毒酶的后提取工藝

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710955530.5
• 申請日: 2017-10-14
• 公開（公告）號: CN107586761B
• 公開（公告）日: 2021-03-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 郭海巖;劉剛;王興業(yè);王茂超;儀光明;郭莎莎;王洪軍
• 申請（專利權(quán)）人: 山東仙普愛瑞科技股份有限公司
• 主分類號: C12N9/00
• 分類號: C12N9/00;C12R1/84
• 代理公司: 濟南舜源專利事務(wù)所有限公司 37205
• 代理人: 呂翠蓮;李江

本發(fā)明提供一種畢赤酵母生產(chǎn)肝臟解毒酶的后提取工藝，所述的后提取工藝：將畢赤酵母發(fā)酵液依次經(jīng)過離心、超濾、過陽離子交換層析柱、洗脫、濃縮以及噴干步驟得到肝臟解毒酶。本發(fā)明操作簡易、環(huán)保、能耗低，與鹽析法相比無需使用大量的無機鹽。提取肝臟解毒酶的純度高，穩(wěn)定性好。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種酶的后提取工藝，具體涉及一種畢赤酵母生產(chǎn)肝臟解毒酶的后提取工藝，屬于酶工程技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

肝臟解毒酶的提取是指從肝臟解毒酶發(fā)酵液中將肝臟解毒酶提取出來的過程。由于畢赤酵母菌在發(fā)酵過程中需要加入大量培養(yǎng)基成分，而且畢赤酵母菌在發(fā)酵過程中也會產(chǎn)生其他副產(chǎn)物，因此，在提取和純化肝臟解毒酶的過程中需要經(jīng)過一系列鹽析、有機溶液沉淀等過程。

傳統(tǒng)的方法需要消耗大量的無機鹽，能耗大，且不環(huán)保；制備的肝臟解毒酶中含雜質(zhì)蛋白較高，且提取過程中肝臟解毒酶的結(jié)構(gòu)極易被破壞，導(dǎo)致?lián)p失率高，提取效率低下。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明為解決現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，提供一種畢赤酵母生產(chǎn)肝臟解毒酶的后提取工藝，以實現(xiàn)以下發(fā)明目的：

（1） 降低能耗，克服現(xiàn)有技術(shù)中需使用大量無機鹽進行鹽析的問題；

（2） 提高制備肝臟解毒酶的純度；

（3） 降低提取過程中肝臟解毒酶的損失率。

為解決上述技術(shù)問題，采用以下技術(shù)方案：

一種畢赤酵母生產(chǎn)肝臟解毒酶的后提取工藝，所述的后提取工藝：將畢赤酵母發(fā)酵液依次經(jīng)過離心、超濾、過陽離子交換層析柱、洗脫、濃縮以及噴干步驟得到肝臟解毒酶干粉。

所述的離心：采用離心機將畢赤酵母發(fā)酵液離心，采集上清液；所述的離心：轉(zhuǎn)速為15000-20000 rpm/min，離心效率為2.5-3.5T/h。

所述的超濾：將離心上清液先經(jīng)過100kda中空纖維柱超濾，再經(jīng)過10kda中空纖維柱超濾，得到肝臟解毒酶溶液。

所述的過陽離子交換層析柱：將陽離子交換層析柱用磷酸緩沖液平衡至ph為6.0；將肝臟解毒酶溶液調(diào)ph至6.0，然后過陽離子交換層析柱，流速控制在1.5-2.5BV/h。

所述的洗脫：用ph為7.0磷酸二氫鉀-氫氧化鈉緩沖液進行洗脫離子交換柱，當洗脫液的OD280達到0.08時結(jié)束，不收集洗脫液；再用ph為9.0的甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液進行洗脫離子交換柱，收集洗脫液。

所述的濃縮：采用反滲透膜進行濃縮，反滲透膜孔徑為0.0001um，控制壓力為1.1Mpa。

所述的噴干：向獲得的肝臟解毒酶濃縮液中，依次加入脫脂乳、海藻糖和山梨醇，所述脫脂乳、海藻糖和山梨醇質(zhì)量比為1:1:1。

所述的100kda中空纖維柱超濾：中空纖維柱的高度2360mm，直徑225 mm，超濾速度為2T/h。

所述的10kda中空纖維柱超濾：中空纖維柱的高度2280mm，直徑160mm，超濾速度為1.2T/h。

制備的肝臟解毒酶干粉：效價為840000U/g以上。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：

（1）本發(fā)明操作簡易、環(huán)保、能耗低，與鹽析法相比無需使用大量的無機鹽。

（2）本發(fā)明提取肝臟解毒酶的純度高，肝臟解毒酶中的雜蛋白含量低于2.5%；與傳統(tǒng)的有機溶劑沉淀法相比，獲得的肝臟解毒酶中雜質(zhì)蛋白含量減少10%左右。

（3）本發(fā)明提取工藝可以很好的保護肝臟解毒酶的穩(wěn)定性，避免高溫對肝臟解毒酶的破壞，提取過程中肝臟解毒酶的損失率低于1%；而傳統(tǒng)的工藝會造成5%的損失。