[發明專利]一種蘋果腐爛病病原菌快速接菌及致病力快速鑒定的方法

在審

• 申請號: 201710954859.X
• 申請日: 2017-10-14
• 公開（公告）號: CN107517726A
• 公開（公告）日: 2017-12-29
• 發明（設計）人: 張道遠;李小雙;劉曉潔
• 申請（專利權）人: 中國科學院新疆生態與地理研究所
• 主分類號: A01G1/00
• 分類號: A01G1/00;A01G7/00
• 代理公司: 烏魯木齊中科新興專利事務所65106
• 代理人: 張莉

1.一種蘋果腐爛病病原菌快速接菌及致病力快速鑒定的方法，其特征在于按下列步驟進行：

蘋果腐爛病病原菌的培養：

a、采用PDA平板培養腐爛病病原菌，用直徑5mm打孔器在黑腐皮殼菌Valsa mali 03-8的菌落邊緣打孔，所取下來的菌餅接種在PDA平板的中央，溫度25℃暗培養3天待用，其中所用菌株黑腐皮殼菌Valsa mali 03-8為腐爛病的強致病力菌株；

枝條接菌處理：

b、選取健康的新疆野蘋果、栽培蘋果或栽培海棠枝條，截成15cm長的小段，水沖洗干凈后用濃度為70%酒精浸泡10min，然后用無菌水沖洗、晾干，枝條兩端用石蠟封口待用；

c、用浸泡濃度為70%酒精的脫脂棉球擦拭消毒劃布輪，待酒精晾干用劃布輪刺傷樹皮，刺傷長度至2cm，備用；

d、用打孔器在已培養好的PDA培養平板上打孔，取步驟a得到的菌餅貼在步驟c的刺傷部位，在接種上方0.5cm處覆一塊脫脂棉，用移液槍在棉球上方懸空滴加800μl的無菌水使棉球浸濕，再用封口膜將其和接種體同時包扎；

e、將濾紙浸濕鋪平托盤，再將步驟d已接好菌的樹枝平放置托盤，用保鮮膜覆蓋好托盤，保持濕度，放置溫度25℃培養8天后，記錄枝條發病個數并用游標卡尺測量病斑長度；

葉片接菌處理：

f、選取生長完全展開的新疆野蘋果、栽培蘋果或栽培海棠葉片，大小均一，連葉柄處剪下，用自來水洗干凈，用濃度為70%的酒精擦拭消毒葉片表面，再用已滅菌的二次水沖洗干凈葉片表面酒精，在超凈工作臺中晾干待用；

g、在培養方皿中平鋪濾紙，加入已滅菌的二次水使濾紙完全浸濕，再棄去多余水，放入步驟f的葉片；

h、用劃布輪沿葉片主葉脈方向，遠離主葉脈，劃傷葉片2cm長的傷口，再將步驟a的菌餅貼放在刺傷傷口處，蓋好培養皿，用封口膜封住培養皿以便保濕，溫度25℃培養4天后，用葉面積掃描儀記錄病斑面積與葉片面積；

發病情況統計：

i、侵染處理后第8天，按常規方法測量并統計枝條發病數以及各發病空病斑長度，根據記錄的枝條病斑長度，計算出枝條發病率和平均病斑長度；

j、侵染處理后第4天，按常規方法用葉面積掃描儀測量病斑面積和葉片面積，根據記錄的葉片病斑面積和葉面積，計算出葉片病斑比率。

2.根據權利要求1所述一種蘋果腐爛病病原菌快速接菌及致病力快速鑒定的方法，其特征在于步驟c和步驟h中用劃布輪刺傷枝條和葉片表面，形成大小均一的刺傷傷口。