[發明專利]一種脂肪SVF細胞臨床級高效制備和凍存的方法及其用途

有效

• 申請號: 201710954117.7
• 申請日: 2017-10-13
• 公開（公告）號: CN107475190B
• 公開（公告）日: 2020-05-19
• 發明（設計）人: 李文榮
• 申請（專利權）人: 上海萊馥醫療科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;C12N5/071;C12N5/077;A01N1/02;A61K35/35;A61P29/00;A61P19/02;A61P19/08
• 代理公司: 上海信好專利代理事務所(普通合伙) 31249
• 代理人: 周乃鑫

1.一種脂肪SVF細胞臨床級高效制備方法，其特征在于，該制備方法包含：

步驟S1：在無菌條件下采集脂肪樣本，保存在保存液中，加入洗滌液對脂肪樣本進行預處理；

步驟S2：將預處理的脂肪樣本離心，脂肪組織呈黃色，取出脂肪組織并加入等體積已預熱的消化液，密封，在恒溫條件下使脂肪組織和消化液混合均勻，消化至無大塊組織塊或雖有大塊組織塊但聚集大量脂質，離心；

步驟S3：待步驟S2離心結束，去除上層脂質，加入洗滌液將沉淀重懸混勻，過濾，再次添加洗滌液，離心，去除上清液，得到脂肪SVF細胞；

在步驟S1中，所述的洗滌液包含：生理鹽水和人血白蛋白；所述的洗滌液選擇質量分數20％的人血白蛋白進行配制，所述的生理鹽水和20％的人血白蛋白的體積比為100:1；

在步驟S2中，所述的消化液包含：人血白蛋白、0.9％生理鹽水、氯化鎂和混合膠原酶，所述的消化液選擇濃度為200mg/mL的氯化鎂水溶液及質量分數為20％的人血白蛋白進行配制，所述的混合膠原酶為廠家Roche的Liberase TM Research Grade；其中，混合膠原酶的質量：20％的人血白蛋白的體積：0.9％生理鹽水的體積：氯化鎂水溶液的體積比為1mg：5mL：15mL：29μL。

2.根據權利要求1所述的脂肪SVF細胞臨床級高效制備方法，其特征在于，在步驟S1中，所述的保存液包含：氯化鈉、青霉素和鏈霉素。

3.根據權利要求2所述的脂肪SVF細胞臨床級高效制備方法，其特征在于，在所述的保存液中，所述的氯化鈉采用0.9％生理鹽水；所述的青霉素的濃度為100μg/mL；所述的鏈霉素的濃度為100μg/mL。

4.根據權利要求1所述的脂肪SVF細胞臨床級高效制備方法，其特征在于，在步驟S2中，所述的消化液預熱的溫度為37℃。